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研究背景:据全球癌症调查最新数据显示,胆道癌症每年新发21.9万余例,死亡16.5万余例,而我国癌症数据显示胆道癌症每年新发5.28万余例,死亡4.07万余例,约占全球的1/4。胆道癌症(Biliary tract cancer,BTC)包括胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)和胆囊癌(gallbladder carcinoma,GBC),胆管癌男女发病率相差不大,而胆囊癌的女性发病率和死亡率均明显高于男性。胆道癌症起病隐匿,没有明确的直接原因,但是肝吸虫感染、原发性硬化性胆管炎、胆结石等胆道炎症与胆道癌症的发生发展有关。在慢性炎症状态下载脂蛋白B mRNA编辑催化多肽样酶(Apolipoprotein B mRNA editing catalytic polypeptide-like enzyme,APOBEC)可将胞嘧啶(C)脱氨成为尿嘧啶(U)。在人类癌症中,APOBEC胞苷脱氨酶诱变模式普遍存在。而与APOBEC相对应的机体内存在尿嘧啶DNA葡萄糖基转移酶(uracil-DNA glycosylase,UNG),它是核酸修复通路启动蛋白,可以识别APOBEC家族引起的C>U突变,因此APOBEC家族与UNG之间存在平衡性,机体突变水平得以达到稳态。有外显子测序结果显示,胆道癌症存在APOBEC突变标签。研究目的:分析APOBEC3A/B(rs12157810、rs12628403、rs2267401)和UNG(rs3890995)共四个位点的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)对胆道炎症、胆管癌和胆囊癌的发生发展的影响,以及SNP位点间的交互作用,并且对有统计学差异的SNP位点进行功能验证。探索影响我国胆道系统疾病发生的遗传因素,为胆道癌症的早期预防提供科学依据。研究方法:本研究采用病例对照研究设计,一共纳入3242例研究对象,其中包括1240例健康对照,808例胆道系统炎症病人,1194例胆道系统癌症病人(741例胆管癌患者和453例胆囊癌患者)。采用荧光探针实时定量PCR技术对4个SNP进行检测分型。采用Microsoft Excel 2016进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验并且使用Sanger测序进行分型结果验证,采用χ~2检验和logistic回归模型研究APOBEC3A、APOBEC3B、UNG遗传多态性及其交互作用在胆道系统癌症发生中的作用,以提出假设。采用双荧光素酶报告检测系统进行SNP位点功能验证假设,并用t检验进行统计学分析。研究结果:1、APOBEC3A、APOBEC3B和UNG基因多态性与胆道系统疾病的关系(1)APOBEC3A/3B和UNG基因多态性与胆道炎症和胆道癌症的关系与AA基因型相比,rs12157810 CC基因型可显著降低健康人患胆道炎症的发病风险(CC:AOR=0.582,95%CI 0.432-0.785,P<0.001)。Rs12157810 SNP位点CC基因型对健康人发生胆道癌症是保护因素(CC:AOR=0.473,95%CI 0.366-0.612,P<0.001)。与健康人群相比,rs12628403和rs3890995低频基因型在胆道炎症组和胆道癌症组中的分布没有差别。至于rs2267401,根据其缺失突变的特性,我们将其分为两种情况。一种是rs12628403 AA型APOBEC3B没有发生缺失突变。rs2267401 GG型增加健康人患胆道癌症风险(AOR=1.829,95%CI 1.242-2.693,P=0.002)。第二种情况是rs12628403 AC型APOBEC3B发生单个碱基缺失突变。将T基因型作为对照组,rs2267401 G型增加健康对照患癌风险(AOR=1.410,95%CI1.141-1.744,P<0.001)。(2)性别因素对APOBEC3A/3B和UNG多态性胆道系统疾病中的影响将胆道癌症区分为胆管癌和胆囊癌,发现rs2267401显性模型(TG+GG)对男性胆管癌有更加明显的保护作用而对女性胆管癌没有作用(男性胆管癌VS健康对照TG+GG:AOR=0.612,95%CI 0.415-0.902,P=0.013;女性胆管癌VS健康对照TG+GG:AOR=0.815,95%CI 0.494-1.343,P=0.421);在胆囊癌中,rs2267401显性模型(TG+GG)和部分缺失G基因型对女性的危险作用高于男性(男性胆囊癌VS健康对照TG+GG:AOR=1.926,95%CI 1.112-3.335,P=0.019;女性胆囊癌VS健康对照TG+GG:AOR=2.322,95%CI 1.221-4.416,P=0.010;男性胆囊癌VS健康对照G:AOR=1.814,95%CI 1.232-2.670,P=0.003;女性胆囊癌VS健康对照G:AOR=2.618,95%CI 1.656-4.140,P<0.001)。而rs12628403和rs3890995低频基因型在男女性分布均没有区别,rs12157810低频基因型显著降低健康人群患胆道疾病风险,但是在男女性中分布没有显著区别。(3)APOBEC3A和APOBEC3B的基因多态性的交互作用Rs2267401位点显性模型(TG+GG)与rs12157810显性模型(AC+CC)在胆道炎症和胆管癌的发生中存在显著地协同交互作用(胆道炎症VS健康对照:AOR=0.439 95%CI=0.314-0.614,P<0.001;胆管癌VS健康对照:AOR=0.30195%CI=0.211-0.431 P<0.001)。而在胆囊癌中,rs2267401位点显性模型(TG+GG)与rs12157810显性模型(AC+CC)也存在交互作用(胆囊癌VS健康对照:AOR=0.286 95%CI=0.184-0.444 P<0.001)。2、rs12157810和rs2267401的功能功能实验表明rs12157810的C基因型与A型相比增强APOBEC3A启动子在胆道细胞的活性。而rs2267401 G基因型与T基因型相比在胆管癌中降低APOBEC3B启动子活性,在胆囊癌中增加APOBEC3B启动子活性。结论:1、APOBEC3A启动子区SNP位点rs12157810 C等位基因可降低胆道系统疾病的发病风险。2、APOBEC3B启动子区SNP位点rs2267401 G等位基因可降低胆管癌发病风险,而增加胆囊癌发病风险。rs2267401 G等位基因对降低男性胆管癌发病风险更加明显,而对增加女性胆囊癌发病风险更加明显。