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目的：本研究旨在以表里经配穴理论为指导依据,选取足三里和三阴交穴,使用HepG2荷瘤裸鼠模型为载体,进行电针控瘤干预。以miRNA芯片表达谱筛选的miR-409-5p为立足点,将肿瘤发生发展及免疫抑制微环境中的关键环节TGF-β1定为靶基因,使用生物信息学方法构建“miR-409-5p靶向抑制TGF-β1”的研究主线。运用miRNA mimics 及 antagomir等生物学技术,从体外和体内实验两方面,验证电针控瘤效应的miR-409-5p靶向抑制TGF-β1分子调控机制。以期从基因层面探索电针通过延缓荷瘤生长速度,发挥控瘤效应的作用原理,为针灸作为肿瘤“带瘤生存期”维持阶段的临床应用提供科学依据。方法：本研究主要从电针对HepG2荷瘤裸鼠的控瘤效应观测、miR-409-5p表达谱筛选及靶基因TGF-β1预测和验证、电针控瘤效应的miR-409-5p靶向抑制TGF-β1分子调控机制研究三个方面开展实验工作,并分五个步骤进行实施：1.将32只裸鼠随机分为电针组、电刺激组、模型组与空白组,每组8只动物。建立HepG2荷瘤裸鼠模型,采用电针操作,对裸鼠双下肢“足三里+三阴交”穴进行干预(30 min/天,10天/1疗程),观测电针的控瘤效应。2.通过LC Sciences高通量寡核苷酸miRNA芯片,在干预结束后对电针组和模型组的裸鼠荷瘤组织进行基因表达谱检测,筛选出组间差异表达的miRNAs,并对可能有进一步研究价值的,miR-409-5p吏用qRT-PCR技术,扩大样本验证芯片结果。3.通过LC Sciences公司采用TargetScan、PicTar 及 miRanda数据库的相应算法进行预测,获得差异表达miRN As对应的所有靶基因；参考GO及KEGG富集性分析等方法,并通过查找相关资料和最新文献,筛选出具备显著临床病理特征的靶基因,建立具有研究价值的miRN As-KEGG-network的网络关联表；从中将在肿瘤发生发展及免疫抑制微环境中起重要作用的TGF-β1定为继续探索的靶基因。4.通过MTT法和划痕实验检测miR-409-5pmimics对HepG2细胞增殖和迁移的影响,并检测其对靶基因TGF-β1表达量的影响。5.采用microOFFTM antagomir-409-5p瘤内定点注射技术,封闭miR-409-5p功能。将32只裸鼠随机分为电针+antagomir Ncontrol组、电针+antagomir-409-5p组、模型组与空白组,每组8只动物。观测各组的控瘤效应,裸鼠血清TGF-β1含量,并用免疫组化法检测荷瘤组织的TGF-β1及PCNA表达。结果：1.瘤重比和肿瘤生长抑制率等观测结果显示,电针组优于模型组和电刺激组,差异具有统计学意义(P<0.05)；电针组裸鼠荷瘤生长速度较其余两组相对缓慢。2.差异表达的miRNAs筛选结果,以P值<0.05为上限,分析得到14个差异表达的miRN As基因,其中10个差异基闪为上调表达,4个为下调表达。以P值≤0.01为上限仅筛选得到呈上调表达的miR-409-5p。对miR-409-5p进行qRT-PCR验证,电针组扩增倍数为1.00,模型组为0.24,组间存在倍数差异,电针组miR-409-5p表达与芯片筛选结果一致。3.使用TargetScan等3个数据库的算法计算,再通过GO和KEGG等生物信息分析,均预测到靶基因TGF-β1和：niR-409-5p相关通路有关联性。TGF-β1是肿瘤发生发展和免疫抑制微环境中关键的细胞因子及通路环节,与本课题电针延缓荷瘤生长速度,发挥控瘤效应的机制可能密切相关,故从生物信息学层而初步构建miR-409-5p—TGF-β1通路功能图。4.MTT实验发现miR-409-5p在HepG2细胞的过表达可以抑制细胞增殖,并且调控能力随miR-409-5pmimics浓度的提高和时间增长成正比关系。划痕实验证明,过表达miR-409-5p mimics的肿瘤细胞体外迁移能力明显低于NC mimics组,miR-409-5p在HepG2细胞的过表达也可以降低细胞体外迁移能力。进行qRT-PCR操作,证明miR-409-5pmimicsTGF-β1表达水平有显著影响。5.瘤重比和肿瘤生长抑制率等控瘤效应指标结果显示,电针+antagomir N control组优于电针+antagomir-409-5p组,电针+antagomir-409-5p组优于模型组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)；荷瘤生长速度比较,电针+antagomirNcontrol组相对较缓,电针+antagomir-409-5p组次之。在肿瘤组织TGF-β1表达水平上,也出现同样的规律,以电针+antagomir Ncontrol组最低,电针+antagomir-409-5p组次之,模型组最高的梯状下降分布,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。虽然在血清TGF-β1含量和肿瘤组织PCNA表达水平指标,电针+antagomir Ncontrol组与电针+antagomir-409-5p组均优于模型组(P<0.05),但两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：1.电针可以一定程度的延缓荷瘤生长趋势,但目前仅能证明在HegG2癌细胞株上有作用,还需要选择不同的肿瘤细胞株进行研究。并且本研究观测得到的生长趋势有延缓变化的结果,仅体现在实施干预的这一段时间里,在将来的研究中,需对针灸后效应和电针对荷瘤裸鼠生存时间的影响进行深入探讨。2. miR-409-5p皂抑制HepG2细胞的增殖和迁移,并下调TGF-β1的表达。3.电针控瘤效应与miR-409-5p靶向抑制TGF-β1分子调控通路可能有相关性。电针控瘤效应的具体作用环节肯定还有其它niRNAs和靶基因参与其中,但本研究选择的靶基因TGF-β1是非常重要的细胞因子,从多个因素影响肿瘤内环境,能观测的效应变化才如此显著,但还需要进行多次的重复实验加以验证。