肝癌是我国常见恶性肿瘤之一。死亡率高，在恶性肿瘤死亡顺序中仅次于胃癌、食道癌而居第三位，在部分地区的农村中则占第二位，仅次于胃癌。但目前肝癌的中、晚期治疗尚无有效之法。综合治疗，特别是以中西医结合方法为主的综合治疗是提高肝癌疗效的有效途径。近年来有人提倡“以毒攻毒”法来治疗肝癌，其中就有用斑蝥及其衍生物。斑蝥酸钠是斑蝥的衍生物之一，其抗肿瘤谱比较广，且副作用小，但抗肿瘤的作用机制和途径目前尚不完全清楚。曾有人报道斑蝥酸钠在体外可诱导肝癌细胞凋亡，但有关斑蝥酸钠对正常肝细胞和血管内皮细胞的体外研究目前尚未有报道。鉴于此，我们在江苏省重点实验室开放基金的资助下，以人肝癌细胞HepG2、人正常肝细胞L-02及血管内皮细胞体外培养模型为基础，探讨斑蝥酸钠治疗肝癌的机制及其安全可靠性。研究目的(1)观察不同浓度的斑蝥酸钠在体外不同时间段内对人肝癌细胞HepG2的影响，找出最佳剂量与最佳时间，为临床提供理论依据；(2)研究斑蝥酸钠作用于人肝癌细胞HepG2的同时，观察其对人正常肝细胞和血管内皮细胞生长的影响，分析其毒副作用；(3)研究斑蝥酸钠抗肝癌的机制。研究方法(1)细胞培养参考文献。(2)细胞生长抑制实验采用噻唑蓝(MTT)还原法测定吸光度(OD)，计算抑制率和存活率，同时在倒置显微镜下观察不同浓度斑蝥酸钠处理后的HepG2、L-02和血管内皮细胞形态的变化，并摄影。(3)细胞凋亡检测采用流式细胞仪、AO／EB荧光染色方法、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳检测不同剂量斑蝥酸钠作用不同时间细胞的凋亡情况。(4)一氧化氮浓度检测采用经典Griess Reagent检测各剂量组细胞上清液中一氧化氮浓度。研究结果(1)斑蝥酸钠对细胞生长的影响不同剂量斑蝥酸钠与HepG2、L-02及血管内皮细胞共同孵育24h和48h后，中剂量斑蝥酸钠对人肝癌细胞HepG2抑制作用比对人正常肝细胞L-02抑制作用强，对血管内皮细胞抑制作用与对人正常肝细胞L-02抑制作用基本相当；细胞形态学可见在斑蝥酸钠作用24h后，细胞逐渐变圆，皱缩，贴壁细胞数减少，细胞肿胀，大小不一致，细胞间隙增宽，其中肝癌细胞变化更为明显，且出现大量细胞碎片。(2)细胞凋亡检测①在流式细胞仪检测中发现不同剂量的斑蝥酸钠对HepG2均有一定的诱导凋亡作用，在DNA直方图上均可见到典型的亚二倍体“凋亡峰”，中剂量36h凋亡率为54.86％；对L-02几乎没有诱导凋亡作用；对血管内皮细胞凋亡率为24.29％，可检测到典型的亚二倍体“凋亡峰”；②在荧光显微镜可见正常对照组和L-02用药组无明显凋亡细胞；HepG2小剂量组可见早期凋亡细胞，表现为细胞核偏移，细胞出芽；晚期凋亡细胞增多，见凋亡小体，并随着剂量和时间增加而增加；③电镜下可见斑蝥酸钠处理24h后肝癌细胞皱缩，微绒毛结构减少甚至消失，胞浆空泡形成，核固缩，可见胞浆起泡和凋亡小体；④琼脂糖凝胶电泳测得不同剂量斑蝥酸钠处理HepG2、L-02和血管内皮细胞24h后，HepG2的DNA电泳可见“梯状”条带，L-02和血管内皮细胞则不明显。(3)一氧化氮浓度检测斑蝥酸钠作用24h后，三种细胞的NO分泌量均见增多，且[HepG2]＞[血管内皮细胞]＞[L-02]。与小、大剂量组相比，中剂量组NO分泌最高，有统计学意义。研究结论(1)斑蝥酸钠对HepG2有明显抑制增殖的作用，而对L-02和血管内皮细胞抑制作用较小。(2)斑蝥酸钠可诱导HepG2和血管内皮细胞的凋亡，且对HepG2的凋亡作用更为明显，对L-02基本没有诱导凋亡作用。该结果对斑蝥酸钠的临床应用具有一定的参考价值。(3)斑蝥酸钠可通过促进细胞分泌NO而抑制DNA的合成，诱导细胞凋亡。