【摘 要】
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增加块茎淀粉含量,改良淀粉品质是提高马铃薯工业淀粉利用效率、拓宽其应用领域的前提。随着对淀粉生物合成代谢途径分子生物学机理研究的深入,运用基因工程途径调控淀粉生物合
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增加块茎淀粉含量,改良淀粉品质是提高马铃薯工业淀粉利用效率、拓宽其应用领域的前提。随着对淀粉生物合成代谢途径分子生物学机理研究的深入,运用基因工程途径调控淀粉生物合成中相关酶的活性增加淀粉含量,改良淀粉品质成为可能。
研究业已表明,在植物中,与淀粉粒结合的淀粉合成酶(GBSSI)是唯一决定贮藏器官中直链淀粉合成的酶,催化淀粉生物合成底物(ADP-葡萄糖)形成的腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是淀粉生物合成的限速酶,其活性受昼夜周期变化的调控;大肠杆菌编码AGPase的glgC基因马铃薯体内表达可提高其块茎淀粉含量达60﹪。为了提高块茎内淀粉含量和获得糯性淀粉块茎,本研究拟用大肠杆菌glgC编码的AGPase替代马铃薯内源AGPase,提高和稳定AGPase活性,以期增加块茎淀粉含量;同时用反义cDNA结构抑制GBSSI活性,达到抑制直链淀粉合成,获得糯性淀粉块茎的目的。为此,本论文通过PCR和RT-PCR等方法,获得了大肠杆菌glgC基因,马铃薯GBSSIcDNA和块茎特异性表达的GBSSI启动子,并分别构建了由GBSSI、CaMV35S启动子驱动的glgC和反义GBSSIcDNA五个植物转化载体,它们分别包含以下融合基因:①GBSSI启动子与GUS融合基因,旨在为块茎生物反应器目的载体的构建提供基本框架。②CaMV35S和GBSSI启动子分别驱动glgC的融合基因,旨在比较两个启动子在驱动glgC表达、增加块茎淀粉合成的区别;③GBSSI启动子驱动GBSSIcDNA反义结构、GBSSI和CaMV35S两个启动子分别驱动glgC的融合基因,体内表达两融合基因,以期比较在直链淀粉合成抑制条件下,CaMV35S和GBSSI启动子驱动glgC表达、提高支链淀粉合成的区别。
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