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目的:子宫内膜癌(Endometrial Carcinoma,EC)在全球女性中的发病率及病死率不断增加,是最为常见的女性生殖系统三大恶性肿瘤之一。据不完全统计,子宫内膜癌约占女性生殖系统恶性肿瘤的20%-30%,最常见的病理类型为腺癌,严重威胁着广大女性的身心健康。二十一世纪以来,子宫内膜癌在我国女性中的发病率显著升高,随着雌孕激素的非正规替代治疗及滥用的增加,内膜癌的发病人群逐渐呈现年轻趋势。子宫内膜癌的发生、发展是一个多因素、多环节的病理过程,其病因及发病机制尚未阐释清楚。随着分子生物学和免疫学的发展,越来越多的病因学研究集中在多种关键分子或信号通路上,其中P物质(Substance P,SP)因其分布广泛而备受关注。P物质是由11个氨基酸残基组成的小分子多肽,其分子量为1340,由TAC-1基因编码。P物质属于速激肽家族,广泛分布于中枢神经及外周组织中,具有多种生物学活性。P物质能够参与免疫功能的调节,增强创伤后的神经组织的修复,此外P物质对多种细胞有促增殖作用,当机体在受到创伤性刺激时,P物质可诱导血管内皮细胞和成纤维细胞的增殖。近年来,随着国内外学者们的深入研究P物质在肿瘤组织中的重要作用也逐渐被大家所熟知,在多种肿瘤如乳腺癌、胃癌、胰腺癌、喉癌、肺癌、黑色素瘤等中P物质的表达活性都有明显升高。迄今为止尚未见P物质与子宫内膜腺癌的研究报道,在子宫内膜腺癌中P物质的表达情况如何亦不清楚。因此,本实验利用实时荧光定量PCR法、Western Blotting法测定P物质在子宫内膜腺癌组织及细胞中的表达情况,采用MTT法及Transwell小室侵袭实验检测P物质对子宫内膜腺癌细胞增殖及侵袭的影响,旨在探讨P物质在子宫内膜腺癌发生、发展中的作用及意义。方法:1荧光定量PCR技术检测子宫内膜腺癌组织及Ishikawa细胞株中P物质mRNA的表达情况:采用子宫内膜腺癌组织及Ishikawa细胞株作为实验组,正常子宫内膜组织作为对照组,检测其中P物质的mRNA的表达情况。2 Western Blotting方法检测子宫内膜腺癌组织及Ishikawa细胞株中P物质表达的蛋白含量:采用子宫内膜腺癌组织及Ishikawa细胞株作为实验组,正常子宫内膜组织作为对照组,检测其中P物质蛋白的表达情况。3 MTT法检测不同浓度的P物质作用于Ishikawa细胞48h后的体外增殖情况:在处于对数生长期的Ishikawa细胞中分别加入不同浓度的P物质(10-9、10-8、10-7、10-6mol/l),置于5%的CO2、37℃的恒温培养箱中培养48h后,检测Ishikawa细胞的增殖情况。4 Transwell法检测经不同浓度P物质处理后Ishikawa细胞侵袭能力的变化:在Ishikawa细胞中分别加入不同浓度的P物质,Transwell小室用Matrigel胶包被后,逐滴加入各组细胞,置入5%的CO2、37℃恒温培养箱中培养24小时,固定染色后,计数落入小孔中的各组细胞数。5统计学方法:选用统计学软件SPSS 13.0进行分析,本实验数据满足正态性分布,计量资料以均数±标准差表示,用t检验或单因素方差分析比较各组之间差异,α=0.05为检验水准,P<0.05有统计学意义。结果:1荧光定量PCR技术检测P物质mRNA在子宫内膜腺癌组织、Ishikawa细胞株和正常子宫内膜组织中的表达情况:子宫内膜腺癌组织中P物质表达量为2.62±0.13,Ishikawa细胞中为3.65±0.28,正常组织中为1.02±0.02,子宫内膜腺癌组织及Ishikawa细胞中P物质的表达明显高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。2 Western Blotting方法检测子宫内膜腺癌组织、Ishikawa细胞株、正常子宫内膜组织中P物质表达的蛋白量:结果显示P物质蛋白在子宫内膜腺癌组织、Ishikawa细胞株及正常组织中的表达量分别为1.06±0.09、1.20±0.11及0.82±0.06;子宫内膜腺癌组织及Ishikawa细胞株中P物质表达明显高于正常组织(P<0.001),结果有显著差异。3 MTT法检测不同浓度P物质(10-9、10-8、10-7、10-6mol/l)作用于子宫内膜腺癌Ishikawa细胞48h的增殖率分别为:8.933±0.615%、14.667±1.195%、26.523±3.374%、20.983±1.911%。结果显示,当P物质浓度在10-9mol/l-10-7mol/l时,与Ishikawa细胞共培养48小时后,随着P物质浓度的增加,细胞增殖能力逐渐增强,但当P物质增加到10-6mol/l时,细胞增殖能力有所下降。各组间差异明显(P<0.01),有统计学意义。4 Transwell实验法检测Ishikawa细胞经不同浓度P物质处理后的迁移细胞数:在侵袭实验中P物质浓度选取10-9mol/l-10-7mol/l,与Ishikawa细胞共培养48小时后,肿瘤细胞穿过基底胶的数量分别为:26±5.612、37.6±7.603、49.6±9.737,随着P物质浓度增加迁移细胞数逐渐增多。各组间差异明显(P<0.01),有统计学意义。结论:1 P物质在子宫内膜腺癌中的表达明显高于正常子宫内膜组织,提示P物质可能参与了子宫内膜腺癌的发生、发展过程,有希望为子宫内膜腺癌的诊断提供新的分子学标志物。2 P物质能显著增强子宫内膜腺癌细胞的增殖能力,说明P物质促进了子宫内膜腺癌的进展,有利于进一步阐释子宫内膜腺癌的发病机制。3 P物质能显著增强子宫内膜腺癌细胞的侵袭能力,并且随着P物质浓度升高其促侵袭能力越强,提示P物质可能在子宫内膜腺癌的恶变过程中起到重要作用,有助于对子宫内膜腺癌预后的判断。