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猪瘟(Classical swine fever,CSF)被国际兽医组织OIE列为A类传染病,由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起。近些年来,我国因感染CSFV死亡的猪的数量占全部疫病致死猪数量的三分之一以上,对国内养猪业造成巨大的经济损失和资源浪费。我国通常采用接种猪瘟弱毒疫苗等防控措施来控制猪瘟疫情的爆发。猪瘟疫情由大规模流行逐渐转化为无规律散发流行,尽管免疫时的疫苗剂量和频率都有所增加,但仍未有效及时地控制住猪瘟的蔓延。由于滥用猪瘟弱毒疫苗以及野毒株的变异,猪瘟疫情出现慢性、隐性感染,导致难以区分疫苗免疫猪与野毒感染猪,从而使疫情更加难以控制。因此,研制能鉴别诊断、安全高效的新型基因工程亚单位疫苗是全世界养猪业的迫切需求。为制备具有免疫原性的CSFV E2蛋白,并对其进行纯化和免疫原性分析。将E2基因插入原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-E2。并将质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,经SDS-PAGE电泳和Western-Blot结果证明,本试验成功表达出可溶的E2蛋白。分别对IPTG的终浓度、诱导温度及诱导时间进行优化,结果表明当IPTG终浓度为0.1mmol/L在18℃的条件下诱导16 h,E2蛋白的可溶表达量最高。通过分子筛一步纯化E2蛋白,其最终质量浓度为0.5 g/L。Western-Blot和ELISA结果证明,纯化后的E2蛋白在变性及非变性条件下均可被猪瘟阳性血清特异性识别,表明纯化后的E2蛋白成功表达,并且活性良好。将纯化后的E2蛋白分别添加弗氏佐剂、gel 01佐剂和纳米材料等进行乳化免疫BALB/C小鼠,每周采集小鼠血清测定抗体效价、抗体消长规律并进行中和抗体试验,结果显示,免疫后小鼠血清中抗体水平不断增加并在56天时达到最高,表明E2蛋白免疫原性良好。综上,成功利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达了可溶性E2蛋白,且纯化后的E2蛋白免疫原性良好。