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目的：利用克隆得到小鼠scya1、scya2、scya12基因cDNA序列，然后构建三种基因的重组毕赤酵母表达载体，使其在原核宿主菌中得到富集，再转化到毕赤酵母宿主中进行表达并鉴定表达产物的功能。
方法：用Trizol法从小鼠肝脏组织中提取总RNA，利用RT-PCR技术扩增小鼠scya1、scya2、scya12基因的cDNA序列。将扩增产物回收纯化后连入pGEM-T载体进行克隆、鉴定、测序。将T载体克隆的小鼠scya1、scya2、scya12基因cDNA序列分别用EcoRI和NotI、EcoRI和XbaI、XhoI和XbaI双酶切后定向克隆到pPICZαA载体中，构建他们的的重组毕赤酵母表达载体，分别命名为pPICZαA/scya1、pPICZαA/scya2、pPICZαA/scya12，再将其克隆、序列测定、酶切线性化后，整合到毕赤酵母X-33的基因组中，用PCR法进行阳性重组子的筛选和表型的分析鉴定。用0.5%的甲醇诱导重组酵母菌分泌表达，取培养物上清进行重组蛋白的SDS-PAGE电泳检测。粗提蛋白后进行简单的抑菌实验研究。
结果：1. 完成了小鼠scya1、scya2、scya12基因cDNA序列在pGEM-T载体上的克隆、鉴定和序列测定，它们的序列测定结果分别与NCBI里公布的登录号为NM_011329-2、NM_011333-3和NM_011331-2的cDNA序列一致。
2. 小鼠scya1、scya12基因的cDNA克隆序列经双酶切、连接到pPICZαA毕赤酵母表达载体后，将连接产物转化到大肠杆菌里，连接产物无法在大肠杆菌中得到大量克隆富集。因此，未能实现小鼠scya1、scya12基因cDNA序列整合进酵母基因组进行重组蛋白的诱导表达。
3.成功构建了小鼠scya2基因cDNA序列的重组毕赤酵母表达载体，我们将其命名为pPICZαA/scya2载体。并将该重组表达载体整合到了毕赤酵母的基因组中进行表达，SDS-PAGE电泳可在重组酵母培养物上清中检测到分子量约为16.6KD大小的重组蛋白。粗提重组蛋白未发现明显的抑菌作用。
结论：小鼠scya1、scya12基因cDNA序列可以在pGEM-T载体上稳定存在并进行传代克隆，但其重组毕赤酵母表达载体无法在大肠杆菌中得到大量传代克隆。Scya2基因重组蛋白能够在毕赤酵母中得到表达，为大量获得scya2基因重组蛋白和对其更多功能的研究奠定了基础。本研究首次构建了小鼠scya1、scya2、scya12基因cDNA序列的毕赤酵母表达载体，并且在毕赤酵母菌X-33中诱导分泌表达了scya2基因的蛋白。