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随着经济的高速发展和工业化进程的加速,人类健康面临的非传染性疾病的威胁正日益加重,其中糖尿病患病率和糖尿病患者数量增长之快更令人惊讶,已成为我国面临的严重健康问题。研究发现2型糖尿病(type2diabetes mellitus, T2DM)患者某些肿瘤的死亡率比常人有所增加,如结直肠癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌等,其相关机制尚未明确,但已证实与高血糖、高胰岛素血症、各种生长因子(如IGF-1、VEGF、TGF等)、糖基化终产物(AGEs)等有关。二甲双胍(metformin,MET)是临床上治疗糖尿病的一线药物,其通过激活AMP激活蛋白激酶(activated protein kinase,AMPK)信号系统,使肝脏糖异生减少,同时增加骨骼肌、脂肪等组织对糖的吸收和利用,从而降低血糖。流行病学研究发现服用二甲双胍的糖尿病患者的肿瘤患病率显著低于未服用二甲双胍的糖尿病患者,并且癌症死亡的风险也显著降低。这提示二甲双胍可以一定程度上减少肿瘤的发生或死亡风险。基础研究部分揭示了其内在机制,AMPK信号转导通路不仅是细胞能量代谢调节的重要通路,在细胞能量平衡方面发挥关键作用,而且还参与了对肿瘤细胞增殖和凋亡的调控。二甲双胍通过其受体可以直接作用于肿瘤细胞,继而通过激活肿瘤抑制基因LKB1来激活AMPK,后者能磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian targetof rapamycin, mTOR),并通过mTOR下游分子调控肿瘤细胞增殖。鉴此,本实验观察二甲双胍对人胰腺癌细胞株增殖、细胞周期及相关基因表达的影响,旨在进一步探讨二甲双胍的抗肿瘤效应及可能机制,全面认识其对糖尿病患者尤其是糖尿病并发肿瘤患者的重要意义。目的研究二甲双胍对人胰腺癌细胞株Patu8988增殖的影响,初步探讨其可能机制。方法以不同浓度的二甲双胍干预细胞株Patu8988为实验组,无药物组作对照,干预72h后应用CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,并抽提各组细胞RNA以RT-PCR检测细胞周期素D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关x蛋白(Bax)、p53、金属蛋白酶-3(MMP-3)等基因表达的变化。结果用2.5、5、10、20、40mmol/L的二甲双胍干预细胞72h后,CCK-8检测各组吸光度分别为0.78±0.05、0.75±0.04、0.65±0.02、0.56±0.03、0.35±0.04,与对照组相比细胞生长均受抑制(0.82±0.02,P<0.05或P<0.01),且呈浓度依赖性(r=-0.994,P<0.05),其中10、20、40mmol/L组的抑制作用尤为显著(P<0.01)。用20mmol/L的二甲双胍干预细胞72h后,对照组和干预组细胞G0/G1期所占的百分比分别为(29.16±6.72)%和(48.58±8.42)%,S期分别为(61.41±1.42)%和(47.77±7.19)%,G2/M期分别为(9.42±5.31)%和(3.56±3.71)%,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示二甲双胍干预后,细胞株的MMP-3、CyclinD1、p53基因表达下调,Bcl-2无明显变化,Bax表达上调,且MMP-3表达下调的程度呈浓度依赖性(r=-0.866, P<0.05)。结论1.二甲双胍抑制人胰腺癌细胞株Patu8988增殖,提示二甲双胍不仅仅能降糖,还可能在一定程度上达到抑制肿瘤的效果。2.二甲双胍抑制细胞周期,下调Patu8988细胞的MMP-3、CyclinD1、p53基因表达,上调Bax基因表达,表明二甲双胍可以影响肿瘤细胞周期及凋亡等基因的表达。3.二甲双胍通过阻滞细胞周期、调节周期及凋亡相关基因的表达来影响肿瘤细胞增殖,发挥抗肿瘤效应。