目的：通过构建靶向Notchl基因的shRNA真核表达载体,探讨小干扰RNA干扰技术沉默Notchl基因表达对人乳腺癌MCF-7细胞生物学的影响。方法：根据Genebank提供NOTCH1基因序列,遵循siRNA设计原则,设计2条干扰序列,退火后分别克隆到含BamH1及HindⅢl双酶切位点的pGsensil表达载体中,并进行双酶切、测序鉴定。用脂质体介导法将2个shRNA真表达载体分别转染到乳腺癌MCF-7细胞中。采用RT-PCR方法检测转染前后乳腺癌细胞中NOTCH1基因mRNA表达的变化,筛选出干扰效率最强的shRNAo将筛选出的干扰效率最强的shRNA稳定转染到MCF-7细胞。运用RT-PCR、Western Blotting及MTT分别检测干扰阻断Notchl信号通路前后MCF-7细胞的RNA、蛋白质及细胞增殖的变化。结果：重组质粒经BamHⅠ及HindⅢ双酶切后形成条带与预计值一致,插入序列经基因测序与设计序列相符。与正常对照组相比转染pGenesil-NOTCHl-shRNA1、转染pGenesil-NOTCH1-shRNA2的MCF-7细胞中NOTCH1基因mRNA的表达明显降低(p<0.05)。其中pGenesil-NOTCH1-shRNA2的干扰效果最强。将干扰效率最强的pGenesil-NOTCH1-shRNA2重组质粒稳定转染MCF-7细胞后,采用RT-PCR及West ern Blotting检测Notchl基因的mRNA及蛋白表达均下调(p<0.05)。METT检测细胞增殖状况,与对照组相比细胞增殖率降低(p<0.05)。结论成功构建了NOTCH1基因的shRNA真核表达载体pGenesil-NOTCH1-shRNA并且有效的抑制了乳腺癌细胞中NOTCH1基因mRNA、蛋白表达和MCF-7细胞的增殖。