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[目的]: 龋病是最常见的人类感染性疾病之一。变形链球菌是人类龋病的主要致病菌之一,其在牙面黏附定植是致龋的首要条件。变形链球菌菌体胞壁上的表面蛋白P1与细菌黏附密切相关,是其主要黏结素。本课题旨在摸索高效率、条件温和的方法分离纯化带有活性的变形链球菌表面蛋白P1,为进一步分析表面蛋白P1与唾液获得性膜特异黏附的分子机制,进行黏结素的黏附功能区定位奠定实验基础。 [方法] 1.硫酸铵分级沉淀法提取非变性变形链球菌表面蛋白P1粗提物,运用SDS-PAGE分析粗提蛋白; 2.用AKTA explorer100快速纯化工艺开拓系统,采用阴离子交换原理分离纯化非变性变形链球菌表面蛋白P1,运用UNICORN5.11软件及SDS-PAGE分析结果。 [结果] 1.经硫酸铵分级沉淀法初步分离出的表面蛋白P1粗提物用SDS-PAGE电泳结果为可见分子量约185kD的蛋白条带,同时亦可见数条其余分子量的非目的条带,其蛋白含量约为0.146mg/ml; 2.强阴离子交换层析分离纯化出表面蛋白P1,SDS-PAGE电泳结果为可见分子量约185kD的单一蛋白条带。 [结论] 可运用硫酸铵分级盐析沉淀粗提变形链球菌表面蛋白,用Sepharose XL填料(强阴离子交换剂)在pH7.5下,5%,10%,40%,100%NaCl溶液固定梯度洗脱、上样量为40ml时可获得较高得率的纯化P1蛋白。从变形链球菌培养上清液中分离出较纯的表面蛋白P1,为“变形链球菌表面黏结素黏附功能区的定位研究”课题的后续研究提供了基础。