丹葛冲剂对脑缺血小鼠脑内凋亡相关基因bcl-2、c-fos的干预作用

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中风是中老年人的常见病,具有高发病率、高死亡率和高致残率的特点,严重威胁着人类的生命和健康。中风属于急性脑血管病,可分为出血性脑血管病,包括脑出血和蛛网膜下腔出血;以及缺血性脑血管疾病(AICVD),包括脑血栓形成、脑梗塞、腔隙性脑梗死和短暂性脑缺血发作(TIA)等。由于缺血性脑卒中的发病率远高于出血性脑卒中,因此,研究和防治缺血性脑卒中,减少死亡率和致残率,已成为当前医学的攻关重点,是卫生工作和科学研究的一项重要课题。在缺血性脑卒中急性期的治疗中,目前文献报道尚无特效的疗法,其治疗关键是尽早恢复血流,但是随之而来的再灌注本身亦可引起再灌注损伤,缺血的组织器官在恢复血流再灌时,不仅不能使组织、器官功能恢复,反而加重组织、器官的功能障碍,甚至使缺血时的可逆损伤转化为不可逆损伤。目前许多研究证实中医中药在对缺血性脑血管病的治疗和防护方面取得了巨大的进展,尤其在对脑缺血再灌注损伤的防治方面显示出了极大的优势。在脑缺血再灌注损伤的过程中,凋亡起重要作用。目前大量的研究表明细胞凋亡的发生是由基因控制的,各种基因和蛋白在细胞凋亡中的作用各不相同,分为抑凋亡基因和促凋亡基因两大类。近年来,已开展了许多中药对脑缺血后神经细胞凋亡影响的实验研究,并且取得了较大成绩。本课题选用抑凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因c-fos作为研究对象,应用免疫组化法观察其在脑缺血再灌注小鼠神经细胞中的变化,及中药对其表达的影响,从而探寻中药对脑缺血再灌注损伤的防治机制。本文研究的中药丹葛冲剂,主要由丹参和葛根等药组成,具有活血化瘀、行血通络的作用,实验报道亦证实,丹参、葛根对缺血性脑血管病有非常好的疗效。本实验从分子生物学水平探讨中医药对脑缺血再灌注损伤的防治作用及机理,旨在为中医临床的治疗提供实验依据。本文分为文献篇和实验篇两部分,在文献综述部分,首先对近10年来中医药防治缺血性脑血管病所取的进展作一回顾;其次,对脑缺血后神经细胞凋亡相关基因的研究进展作了全面综述;同时,对后世应用经方治疗中风作一概述;最后,试就《金匮要略》中风篇的学术渊源及其学术成就做一简要论述。在实验研究部分,本实验研究选用了小鼠实验性不完全脑缺血再灌注模型。首先,采用HE染色法,观察丹葛冲剂对脑缺血再灌注后脑组织形态学的影响。其次,采用免疫组化法,研究观察小鼠脑缺血再灌注损伤后c-fos、bcl-2的表达及丹葛冲剂对c-fos、bcl-2表达的影响,探讨丹葛冲剂防治缺血性脑血管病凋亡方面的作用机制。中药丹葛冲剂作用于脑缺血再灌注损伤实验分为正常对照组,模型组即脑缺血再灌注组,中药组即丹葛冲剂组。实验各组(除正常组外)分别于造模后30min、6h、3天、5天(d)后取材,用免疫组化技术检测小鼠脑细胞缺血再灌注后c-fos、bcl-2表达的变化及观察HE染色显示脑组织形态学的变化。
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