熟眠方对失眠模型大鼠IL-1β、PGD2和GABA表达的影响

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目的:以中医理论为基础,研究熟眠方对失眠症的治疗作用,并进一步明确熟眠方治疗失眠症的作用机制。在中医药治疗失眠作用于人体的机制尚不明确的情况下,本课题通过观察熟眠方对失眠模型大鼠的病理形态学改变及大鼠下丘脑中细胞因子IL-1、激素PGD2、其合成酶L-PGDS及其受体DPR、中枢神经递质GABA及其受体GABAARa1亚单位表达的影响。对中医药作用于机体的靶点进行探讨。方法:1.清洁级Wistar大鼠给予PCPA腹腔注射,复制失眠大鼠模型,将造模成功大鼠随机分成失眠模型组、熟眠方低、中、高三个剂量组、阳性药对照药(枣仁安神胶囊)组,同时设立空白对照组,每组18只。观察大鼠一般状态,用戊巴比妥钠翻正实验观察大鼠睡眠潜伏期及睡眠总时间的差异。2.应用光学显微镜和透射电镜观察大脑皮质超微结构,观察熟眠方对失眠模型大鼠脑组织结构的改变。3.采用酶联免疫法观察细胞因子IL-1、激素PGD2、神经递质GABA的含量;4.采用荧光定量PCR检测PGD2mRNA、L-PGDS mRNA、DPR mRNA、GABAARa1m RNA的表达。5.采用免疫组化法观察神经递质GABA的表达。结果:1.熟眠方能够改善失眠模型大鼠的一般状态并能减少其睡眠潜伏期增加总的睡眠时间。2.熟眠方具有改善失眠模型大鼠大脑皮质神经元病理改变的作用。3.熟眠方具有提高失眠模型大鼠下丘脑细胞因子IL-1含量的作用。4.熟眠方具有提高失眠模型大鼠下丘脑PGD2含量及PGD2mRNA、L-PGDSmRNA、DPR mRNA的表达的作用。5.熟眠方具有提高失眠模型大鼠下丘脑GABA含量及GABAARa1mRNA表达的作用。结论:熟眠方能够改善失眠模型大鼠一般状态以及减少其睡眠潜伏期增加其总的睡眠时间;改善失眠模型大鼠大脑皮质结构病理改变。同时能够提高失眠模型大鼠下丘脑细胞因子IL-1含量,提高失眠模型大鼠下丘脑PGD2含量及PGD2mRNA、L-PGDSmRNA、DPR mRNA的表达,提高失眠模型大鼠下丘脑GABA含量及GABAARa1mRNA表达。说明熟眠方是通过干预失眠模型大鼠下丘脑细胞因子、激素、神经递质而发挥改善睡眠的的作用。导师王中男教授认为失眠的病机关键是气血阴亏虚、心神失养,治疗上以补气补血、养阴安神为主。中医学的精髓是整体观,以调整阴阳,脏腑的平衡来从整体上探索生命活动的规律。本实验建立在调整阴阳的基础上,选取细胞因子、激素、神经递质等西医的微观指标,从多系统、多靶点、多层面来阐明中药作用与人体的整体作用。目前有关中医药治疗失眠的药理研究多局限于单一的作用研究,不能全面反映中医药的整体调节优势。而本次实验研究能够从多途径、多靶点、多层面的作用神经一内分泌一免疫网络,使被破坏的机体机能恢复平衡,起到改善睡眠障碍,恢复正常生物节律的作用,达到改善失眠之目的。熟眠方在益气滋阴、养血安神的治疗方法指导下,通过干预细胞因子、激素、神经递质而发挥改善睡眠的的作用。
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