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小金蝠蛾Hepialus xiaojinensis Tu.是鳞翅目(Lepidoptera)、蝙蝠蛾科(Hepialidae)、蝠蛾属(Hepialus)昆虫,是我国名贵中药材冬虫夏草的寄主昆虫之一,所产冬虫夏草具有较高的营养价值。为了改变冬虫夏草供不应求的现状,人工培植冬虫夏草寄主昆虫是解决资源匮乏的重要途径。但是,从实际培养的过程中发现,人工饲养的小金蝠蛾存活率极低,而前期研究表明温度是影响其存活率的一个重要因子。当环境温度过高或者过低时对于生物体来说即是一种逆境,而生物对温度胁迫适应的机制研究目前主要集中在两个方面:一是抗氧化保护酶,如超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)等;二是生物界普遍存在的热激蛋白(Heat shock proteins,HSPs)。为了明确小金蝠蛾幼虫对温度胁迫适应性的机理,本文以小金蝠蛾的四龄幼虫为研究对象,主要对受到温度胁迫后的幼虫体内的抗氧化酶活性以及热激蛋白Hsp70的表达量进行了研究,旨在为提高人工饲养小金蝠蛾幼虫存活率提供理论参考。主要研究内容如下:1.温度胁迫对小金蝠蛾幼虫抗氧化酶活性的影响为了测定小金蝠蛾幼虫在受到温度胁迫过后体内的抗氧化酶活性变化,本实验在室内设定了0°C、4°C、12°C、16°C、20°C、24°C、28°C 7个温度梯度,以8°C作为对照,设置4 h和12 h作为处理时间,将小金蝠蛾四龄幼虫置于各温度时间条件下进行胁迫处理。并测定不同温度胁迫不同时间过后小金蝠蛾幼虫体内几种抗氧化酶的活性,以及脂质过氧化水平。结果表明,温度胁迫能够引起小金蝠蛾幼虫抗氧化酶活性的变化,其变化主要表现为:(1)小金蝠蛾幼虫的SOD无论是否受到温度胁迫都具有较高活性,SOD在清除活性氧(ROS)的过程中发挥着巨大的作用;(2)对照组的CAT活性显著性低于各温度处理组,温度胁迫诱导了小金蝠蛾幼虫的CAT发挥作用;(3)不同温度处理下小金蝠蛾POD的活力呈现上升趋势,且在12 h处理后CAT活力有所降低的时候,POD的活力会稍微上升,与CAT共同作用控制H2O2的浓度;(4)各温度处理组的GSTs活性均低于对照组,经过12 h的胁迫过后,GSTs活性呈现降低趋势;(5)作为脂质过氧化指标的丙二醛MDA,在24°C胁迫过后,含量有升高的趋势;(6)从T-AOC的测定结果可以看出,小金蝠蛾在受到温度胁迫后,体内的总抗氧化能力显著性升高,以维持幼虫体内的氧化还原平衡状态。2.温度胁迫对小金蝠蛾幼虫脂肪体Hsp70表达量的影响测定了高温胁迫下小金蝠蛾幼虫脂肪体内热激蛋白Hsp70的表达量的变化。利用?-actin作为内参基因,以含有Hsp70的cDNA为模板,结合实时荧光定量PCR技术分别检测了16°C、24°C、28°C和32°C胁迫4 h和12 h过后Hsp70基因的相对表达量。结果表明,在受到4 h温度胁迫后,小金蝠蛾幼虫脂肪体内的Hsp70的表达量有比较显著的变化(P<0.05),且均高于对照组的表达量。小金蝠蛾幼虫在受到16°C、24°C、28°C 12 h胁迫后,脂肪体内的Hsp70的表达量有显著性的变化(P<0.05),与对照相比,均高于对照组的表达量。短时间(4h)胁迫后Hsp70的表达量均高于长时间(12 h)胁迫后的表达量。3.基于小金蝠蛾幼虫蛋白质组研究所鉴定到的热激蛋白热激蛋白家族有分子伴侣的功能,分子伴侣是一类特殊的蛋白质分子,它与寡聚蛋白质的组装、新生肽链的折叠以及蛋白质的跨膜运输都有关系。但是其本身又并不参与蛋白质的组成。本实验在室内设定了0°C、5°C、15°C、25°C、35°C 5个温度,以10°C作为对照,对受到温度胁迫后的小金蝠蛾幼虫进行蛋白质组测序,鉴定差异蛋白,并对差异蛋白进行COG注释,从注释结果中发现,在小金蝠蛾幼虫受到温度胁迫时,其体内的Hsp60家族、Hsp90家族和Hsp10都发挥了分子伴侣的作用。