辣木叶黄酮的深度共熔溶剂提取、鉴定及生物活性研究

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辣木叶中富含活性物质,本论文基于深度共熔溶剂(DES)提取恩平航天辣木叶中的黄酮类物质(FMOL),考察了八种DESs的黄酮提取效果,得到提取率较高的三种DESs,即氯化胆碱/乳酸(Ch Cl/LA)、氯化胆碱/尿素(Ch Cl/Urea)和氯化胆碱/甘油(Ch Cl/Gly)。通过单因素实验和响应面法优化,得到最佳提取条件下,Ch Cl/LA、Ch Cl/Urea、Ch Cl/Gly的FMOL提取率分别是54.8,63.2,70.4 mg/g。利用不同型号的大孔树脂(如S-8,LX-38和D101)进行分离,其中S-8适用于分离Ch Cl/LA粗提物,吸附率和解吸率分别是29.6%和85.1%;LX-38适用于分离Ch Cl/Urea粗提物,吸附率和解吸率分别是53.8%和56.5%;D101适用于分离Ch Cl/Gly粗提物,吸附率和解吸率分别是34.6%和87.8%。对分离所得的三种FMOL进行组分分析,鉴别了9至10种黄酮化合物,其中3至4种是首次在辣木叶提取物中报道。对FMOL的生物活性(抗氧化活性、抑菌活性、抗肿瘤活性)进行研究。由结果得Ch Cl/LA提取的FMOL在2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)自由基清除(IC50=27.3μg/m L)、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除(IC50=41.2μg/m L)、铁还原抗氧化能力(FRAP)(18.7 mg TE/g)、氧自由基吸收能力(ORAC)(6008.4μmol TE/g),抗氧化活性研究中除ABTS自由基清除活性低于抗坏血酸(Vc)外,其余均优于Vc;Ch Cl/Urea提取的FMOL在DPPH自由基清除(IC50=64.1μg/m L)、ABTS自由基清除(IC50=9.5μg/m L)、FRAP(15.5 mg TE/g)、ORAC(4687.2μmol TE/g)等抗氧化研究中均优于Vc;Ch Cl/Gly提取的FMOL在DPPH自由基清除(IC50=74.6μg/m L)、ABTS自由基清除(IC50=9.5μg/m L)、FRAP(14.9 mg TE/g)、ORAC(2632.2μmol TE/g)等抗氧化活性研究中除ORAC低于Vc外,其余均优于Vc。抑菌活性研究中,FMOL的抑菌活性均优于阳性对照(对羟基苯甲酸丙酯),且Ch Cl/LA提取的FMOL对大肠杆菌的抑菌效果最好[抑菌圈:20.2±0.2 mm;最小抑菌浓度(MIC):1.25μg/m L];Ch Cl/Urea提取的FMOL对普通变形杆菌的抑菌效果最好(抑菌圈:18.7±0.6 mm;MIC:0.625μg/m L);Ch Cl/Gly提取的FMOL对大肠杆菌的抑菌效果最好(抑菌圈:17.2±0.0 mm;MIC:1.25μg/m L)。抗肿瘤活性结果表明DESs提取的FMOL具有一定的抗肿瘤活性,且FMOL对HCT116细胞具有较好的抑制作用(IC50=307.8μg/m L),仅略低于金雀异黄酮(IC50=281.7μg/m L)。为了保障FMOL在小肠的充分吸收,采用木糖改性大豆分离蛋白作为壁材,通过复合凝聚法制备FMOL微胶囊,得到最佳制备条件:壁材浓度1.8%大豆分离蛋白(SPI)、3.6%木糖(Xyl)和1.0%明胶(GE),芯壁比为1:6,搅拌速率500 rpm,搅拌时间15 min;包埋率可达到66.5%。体外消化和表征结果表明,微胶囊的应用提高了FMOL的生物可及性(87.6%Vs 96.5%)及肠释放量(0.5%Vs 39.4%)。本研究为辣木叶黄酮的深度共熔溶剂高效提取和生物活性的系统研究提供了一定的参考价值;为辣木叶黄酮微胶囊在功能性食品方面的应用提供了基础依据。
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