1.1.研究目的1)检测胃癌细胞中SLC15A1基因在m RNA及PEPT1蛋白水平的表达情况。2)通过检测胃癌和胃息肉患者外周血中的PEPT1的浓度,探讨PEPT1是否可以作为鉴别胃癌和胃息肉的分子标志物。3)通过研究SLC15A1基因在胃癌细胞生长增殖过程中的作用,初步探讨SLC15A1基因在胃癌发生发展中的作用及机制。1.2.研究方法第一部分内容初步确定了SLC15A1基因在胃癌细胞中的表达情况。首先采用免疫荧光方法对3种胃癌细胞系(SGC-7901、BGC-823、MKN-45)中的PEPT1进行定位;其次,分别用RT-PCR、Western blot方法检测3株胃癌细胞和1株正常胃上皮细胞(GES-1)中SLC15A1基因在m RNA及PEPT1蛋白水平的表达情况;最后,通过ELISA方法检测16例胃癌和16例胃息肉患者外周血中PEPT1的表达水平。第二部分内容探讨了SLC15A1基因对胃癌细胞生长增殖的影响。选取高表达SLC15A1的胃癌细胞系MKN-45,应用慢病毒载体构建SLC15A1基因敲低的胃癌细胞模型。分别通过RT-PCR、Western blot验证SLC15A1基因敲低效果。应用CCK8法检测SLC15A1基因对胃癌细胞生长增殖的影响。1.3.研究结果1)免疫荧光结果证实胃癌细胞系MKN-45、BGC-823、SGC-7901表达PEPT1,并且均位于细胞膜上。2)RT-PCR结果显示BGC-823及MKN-45胃癌细胞中SLC15A1基因在m RNA水平表达高于GES-1,其中MKN-45胃癌细胞表达最高,SGC-7901胃癌细胞SLC15A1基因的m RNA水平表达较GES-1低。3)Western bolt结果显示3种胃癌细胞PEPT1表达水平均较正常胃上皮细胞显著升高,其中MKN-45胃癌细胞的PEPT1表达最高。4)通过ELISA法发现胃癌组与胃息肉组外周血中PEPT1浓度存在显著差异,胃癌组较胃息肉组明显升高。5)CCK8方法证实了抑制SLC15A1基因的表达可以一定程度上抑制胃癌细胞的生长增殖。1.4.结论1)PEPT1位于胃癌细胞膜上,并且胃癌细胞MKN-45、BGC-823中的SLC15A1基因无论是在m RNA水平还是PEPT1蛋白水平的表达均高于正常胃上皮细胞,提示SLC15A1基因在胃癌中具有重要作用。2)胃癌患者外周血中PEPT1浓度显著高于胃息肉对照组,PEPT1或许有望成为鉴别胃癌及胃息肉的新型无创分子标志物。3)下调SLC15A1基因可以在一定程度上抑制胃癌细胞的生长增殖,提示SLC15A1基因可能在胃癌的生长增殖中起着重要作用。