目的：糖尿病肾病（DN）的病理变化较为复杂，肾脏经历了早期肥大和晚期硬化两个主要的病理变化。早期肾脏肥大又经历了肾脏细胞增生（细胞数量增多）和细胞肥大（细胞体积增大）两个过程。一般认为肾脏细胞（包括肾小球和肾小管细胞）在经历短暂的增生期后即转为细胞肥大期。肾脏肥大与晚期肾小球硬化和肾小管间质纤维化关系密切。但是，引起肾脏这些病理变化的机制并不十分清楚。多数研究表明许多因素协同作用参与DN的发病。高血糖，血流动力学障碍，各种生长因子（如转化生长因子-?），血管活性物质（如血管紧张素-Ⅱ）等均与其发病有关。细胞周期蛋白的作用近年来受到广泛重视。细胞周期蛋白作为细胞周期调节的重要因子，在细胞的生长调控中起重要作用。多种细胞外信号最终均通过激活或抑制细胞周期蛋白的表达而发挥作用。但是，细胞周期蛋白在糖尿病性肾病发生发展过程中，尤其在早期肾脏细胞增生及肥大阶段的变化及其作用尚无详细研究报道，阐明这些变化和作用将有助于糖尿病肾病的防治。本研究应用大鼠糖尿病模型，观察细胞周期素D1（cyclinD1），细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）及细胞周期蛋白激酶抑制剂p16在糖尿病（DM）早期肾脏细胞的表达，试图阐明其在DM<WP=4>早期肾脏细胞增生和由增生转为肥大过程中的作用。方法：用链脲佐菌素（STZ）诱发实验性糖尿病模型。将雄性Sprague Dawley （SD）大鼠随机分为A组（正常对照组）和B组（糖尿病组）。B组大鼠腹腔单次注射STZ 65mg/kg （STZ用pH 4.5，0.1mol/L枸橼酸钠缓冲液配制），对照组只注射相同体积的枸橼酸钠缓冲液。24小时后，血糖≥16.7mol/L，尿糖+++～++++确认为糖尿病模型成功。分别在注射STZ后第5天、15天、30天各麻醉动物6只，取出肾脏进行以下观察：1. 测定肾重、体重，以计算肾重/体重比。2. 组织经固定后行HE染色，光镜下观察肾脏的病理改变。3.PAS染色，光镜下观察系膜基质和基底膜增厚情况。4. 病理图像分析系统（HPIAS-1000）测定肾小球、肾小管直径。5. 免疫组织化学方法检测肾脏细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、CDK4、p16在蛋白水平的表达，其中CDK4以阳性细胞率作为比较指标。6. 流式细胞术检测肾脏皮质细胞cyclinD1、p16蛋白表达，以荧光指数（FI）表示所测指标的相对含量，FI>1.0为阳性表达。7. 原位杂交方法检测肾脏细胞中cyclinD1在mRNA水平的表达。8. 统计学处理，所有数据均用表示，组间及组内数据比较用t检验，数据统计应用SPSS统计软件完成。结果：1 糖尿病组大鼠在5天时肾重/体重即显著高于正常对照组。15天和30天时，肾重/体重不仅显著高于正常对照组，而且较5天也有显著增高。2 光镜下观察，糖尿病组5天、15天时肾小球、肾小管均未见明显病变。30天时，肾小球、肾小管体积增大。<WP=5>实验过程中，未见基底膜增厚和系膜基质增多。3 病理图像分析系统显示，糖尿病组大鼠肾小球直径[（4.91±0.21）μm]、肾小管直径[（1.468±0.34）μm]在5天时与正常对照组肾小球直径[（4.38±0.17）μm]、肾小管直径[（1.12±0.53）μm]相比无显著差异。15天时,糖尿病组肾小球直径为（6.47±0.16）μm，肾小管直径为（1.98±0.15）μm，均显著高于正常对照组。 30天时，糖尿病组肾小球直径为（6.51±0.32）μm，肾小管直径为（2.23±0.42）μm，仍呈增加趋势。4 免疫组化结果4.1 PCNA蛋白为细胞核表达，以细胞核呈棕黄色为阳性细胞。对照组在5天、15天和30天时均少见肾脏PCNA阳性细胞，阳性细胞主要在肾小管表达，肾小球内未见阳性细胞。糖尿病组5天时肾小球和肾小管阳性细胞数均多于对照组。15天时，糖尿病组肾小球已无阳性细胞，肾小管阳性细胞数虽较5天时有所减少，但仍高于正常对照组。30天时，糖尿病组肾脏阳性细胞数已接近对照组。4.2 CDK4蛋白也为细胞核表达，以细胞核呈棕黄色为阳性细胞。糖尿病组和对照组肾小球在各个时间点均无CDK4阳性细胞；糖尿病组肾小管 5天时阳性细胞数较对照组明显增加，15天时虽较5天有所减少，但仍高于正常对照组，30天时与正常对照组无显著差异。4.3 p16在细胞核和细胞浆均有表达，且以细胞核为主。糖尿病组与对照组肾脏细胞p16蛋白表达在5天，15天时均较弱。30天时，糖尿病组p16蛋白表达已强于正常对照组。<WP=6>5 流式细胞术结果5.1 糖尿病组肾脏皮质细胞p16表达在5天，15天时均低于正常对照组，30天时表达却显著高于正常对照组。5.2 糖尿病组肾脏皮质细胞cyclinD1蛋白水平在5天，15天均显著增高，30天时与对照组无显著差异。6 原位杂交结果：糖尿病组和对照组肾小球cyclinD1 mRNA水平在5天、15天、30天时均无明显增强；糖尿病组肾小管cyclinD1 mRNA水平在5天，15天时均强于对照组，30天时与对照组无差别。结论：1 糖尿病早期肾脏细胞经过短暂的增生期后进入细胞肥大期。2 糖尿病早期，肾脏细胞CyclinD1和CDK4表达经历了一个由增强到逐渐减弱的过程，其变化时相与细胞由以增生为主转为以肥大为主的过程相吻合，提示cylcinD1和CDK4参与糖尿病早期肾脏细胞增生及肥大的调节。3 糖尿病早期肾脏细胞p16的表达经历了由减弱到增