【摘 要】
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目的探寻维甲酸相关孤儿受体(RORα)是否调节MDR1基因表达,从而增强5-FU诱导的胃癌细胞凋亡,研究其可能的分子机制方法用RORα激动剂(SR1001,100n M-1μM,Cayman)和反向激动剂(SR3335,100n M-1μM,Cayman)处理SGC-7901和AGS细胞。通过CBP si RNA敲低CREB结合蛋白(CBP)在细胞中的表达。通过Western blot测定RORα
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目的探寻维甲酸相关孤儿受体(RORα)是否调节MDR1基因表达,从而增强5-FU诱导的胃癌细胞凋亡,研究其可能的分子机制方法用RORα激动剂(SR1001,100n M-1μM,Cayman)和反向激动剂(SR3335,100n M-1μM,Cayman)处理SGC-7901和AGS细胞。通过CBP si RNA敲低CREB结合蛋白(CBP)在细胞中的表达。通过Western blot测定RORα的蛋白表达水平。我们采用免疫共沉淀(Co-IP)来检测RORα与RORα与CBP或HDAC1之间的物理结合。进行染色质共沉淀(CHIP)以确定用SR1001或SR3335处理的细胞中的MDR1基因表达,以评估RORα对MDR1基因启动子上CBP募集的影响。结果本研究中我们发现用RORα激动剂(SR1001)处理细胞可增加胃癌细胞SGC-7901和AGS细胞中的RORα磷酸化,而RORα反向激动剂(SR3335)减少RORα磷酸化。然而,SR1001处理可以降低胃癌细胞中的MDR1蛋白水平,而SR3335促进了其表达。在两种细胞中,RORα与CREB结合蛋白(CBP)和组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)相互作用。SR1001处理减少CBP在MDR1基因启动子上的募集。而SR3335却促进CBP招募到MDR1的启动子上。SR1001或SR3335处理均未改变MDR1基因启动子上HDAC1的募集。敲低细胞中CBP的表达,减少了MDR1基因启动子上RORα的募集。最后,我们发现SR1001可以促进5-FU诱导的AGS细胞凋亡。结论RORα可以增强5-FU诱导的胃癌细胞凋亡,进一步发现研究RORα激动剂通过减少MDR1基因启动子上的CBP的招募,从而降低MDR1表达。
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