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目的:采用免疫组织化学方法来检测PCBP2蛋白在胃癌组织中和在癌旁正常组织中的表达情况;将人胃癌细胞株HGC-27和MKN-45进行细胞培养,采用RNA干扰技术进行shPCBP2#1和shPCBP2#2转染以沉默PCBP2基因表达,采用MTT法、平板克隆形成实验和流式细胞仪检测PCBP2对人胃癌细胞株HGC-27和MKN-45的增殖能力、克隆形成、细胞周期的影响。旨在阐明PCBP2对胃癌的发生、发展的影响,探讨PCBP2作为肿瘤基因标记物对胃癌诊断的价值,为胃癌的早期诊断、早期治疗提供理论依据。方法:1、选取的100例标本,均来自于安徽医科大学第一附属医院存档的胃癌组织和癌旁正常组织。2、利用免疫组织化学方法来检测PCBP2蛋白在胃癌组织中以及在癌旁正常组织中的表达情况。3、选取美国种质保藏中心提供的胃癌细胞株HGC-27和MKN-45进行细胞培养。4、将HGC-27和MKN-45细胞进行shPCBP2#1和shPCBP2#2转染,设实验组(转染shPCBP2#1和shPCBP2#2组)和阴性对照组(negative control,NC)。5、采用Western Blot(蛋白印迹法)法检测转染了shPCBP2#1和shPCBP2#2后HGC-27和MKN-45细胞的中PCBP2蛋白的表达情况。6、采用qRT-PCR法检测转染了shPCBP2#1和shPCBP2#2后HGC-27和MKN-45细胞的中PCBP2 mRNA的表达情况。7、采用MTT法来观察转染了转染了shPCBP2#1和shPCBP2#2后HGC-27和MKN-45细胞的增殖情况。8、利用平板克隆形成实验来观察HGC-27和MKN-45细胞被shPCBP2#1和shPCBP2#2转染后的集落形成情况。9、通过流式细胞仪来观察HGC-27和MKN-45细胞被shPCBP2#1和shPCBP2#2转染后的细胞周期情况。10、使用SPSS22.0统计软件包对所获得的实验数据实施统计学处理,计量资料以均数±标准差来表示,两组间差异的比较采用独立样本非配对t检验;计数资料以百分比表示,组间比较采用卡方检验,结果以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.免疫组织化学测定结果,胃癌组织PCBP2的阳性率达(92/100)92%明显高于癌旁组织(31/100)31%,有统计学差异(P<0.001)。2.western bolt检测结果,shPCBP2#1、shPCBP2#2组胃癌细胞中PCBP2蛋白表达水平与阴性对照shControl组比较明显降低HGC-27:0.573±0.062(P=0.023),0.624±0.071(P=0.027)vs 1.252±0.140;MKN-45:0.525±0.052(P=0.021),0.592±0.064(P=0.025)vs 1.323±0.165,有统计学差异(P<0.05)。3.RT-PCR检测结果,shPCBP2#1、shPCBP2#2组胃癌细胞中PCBP2 mRNA表达水平与阴性对照shControl组比较明显降低(HGC-27:0.232±0.063(P=0.017),0.344±0.075(P=0.020)vs 0.622±0.090;MKN-45:0.512±0.084(P=0.030),0.633±0.096(P=0.035)vs 0.955±0.123,有统计学差异(P<0.05)。4.MTT实验结果,shPCBP2#1、shPCBP2#2组胃癌细胞增殖能力与阴性对照shControl组比较明显降低(HGC-27:0.721±0.110(P=0.004),0.633±0.092(P=0.002)vs 1.546±0.182;MKN-45:1.152±0.225(P=0.007),0.966±0.234(P=0.005)vs1.934±0.272),有统计学差异(P<0.01)。5.平板克隆形成实验结果,shPCBP2#1、shPCBP2#2组胃癌细胞克隆形成数量与阴性对照shControl组比较明显降低(HGC-27:256.534±45.216(P=0.006),224.655±42.186(P=0.005)vs 448.573±62.245;MKN-45:15.122±6.044(P=0.002),10.154±5.036(P=0.001)vs 43.264±7.067),有统计学差异(P<0.01)。6.根据流式细胞仪检测结果,shPCBP2#1、shPCBP2#2组中的胃癌细胞G1期的比例与阴性对照shControl组比较,其比例明显增加(HGC-27:69.542±8.321(P=0.023),72.631±8.143(P=0.026)vs 52.471±6.252;MKN-45:79.333±10.187(P=0.029),80.474±10.156(P=0.031)vs 57.325±5.227),有统计学差异(P<0.05);而S期比例与阴性对照shControl组比较明显降低(HGC-27:19.273±3.154(P=0.020),18.365±2.846(P=0.019)vs 30.184±5.266;MKN-45:10.286±2.054(P=0.016),11.144±3.023(P=0.018)vs 30.353±6.147),有统计学差异(P<0.05)。G2期比例与阴性对照shControl组比较无明显变化(HGC-27:10.164±1.055(P=0.077),9.548±1.036(P=0.064)vs 12.283±3.067;MKN-45:7.133±2.046(P=0.057),8.255±2.067(P=0.060)vs 9.262±4.077),无统计学差异(P>0.05)结论:1、通过免疫组织化学测定结果发现,在胃癌组织中PCBP2的表达水平明显高于癌旁的正常组织,提示PCBP2可能与胃癌的发生,发展有关。2、MTT实验显示,沉默PCPB2基因的表达后使得胃癌细胞的增殖能力显著减低,表明PCBP2在胃癌细胞增殖过程中有促进作用。3、通过平板克隆形成实验显示,在沉默PCPB2基因表达后,胃癌细胞的克隆形成数量明显减少,表明PCBP2在促进胃癌细胞的克隆过程中作用明显。4、流式细胞仪检测结果显示,沉默PCPB2基因表达后使得胃癌细胞的G1期比例增加,而S期比例降低,诱导S期阻滞,表明PCBP2在促进胃癌细胞周期进展过程中作用显著。