外周血造血干细胞微泡的提取鉴定及初探其生物学特性

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研究目的:外周血造血干细胞是存在于外周血中的一类具有高度自我更新和分化潜能的造血细胞群体。正常生理条件下外周血中造血干细胞的含量约占骨髓中的0.1%-1%,当给予动员剂刺激后,外周血中的造血干细胞含量增加,CD34+细胞占外周血单个核细胞(MNC)的0.5%-1.5%。随着外周血造血干细胞采集简便、短期内采集,另外输注给受者后造血功能和免疫功能重建快及植入率高,逐渐取代骨髓造血干细胞用于临床。外周血造血干细胞具有促进造血、免疫功能重建、抗肿瘤等作用。研究已证实胚胎干细胞、脐带血造血干细胞、间充质干细胞等干细胞可分泌微泡,而且分泌的微泡携带母细胞的成分及特性,另外分泌的微泡没有了母体细胞的一些缺点。对于外周血造血干细胞能否分泌微泡,目前国内外尚无报道。本研究旨在探讨外周血造血干细胞能否分泌微泡,如果外周血造血干细胞能分泌微泡,初步探讨外周血造血干细胞微泡的生物学特性。研究内容:1.验证外周血造血干细胞能否分泌微泡;2.如果能,开始验证它们的生物学功能。研究方法:1.使用超速离心法提取孵育后外周血造血干细胞培养上清中的“物质”,并应用负染透射电镜从形态上鉴别提取的物质是否为微泡;2.如果验证外周血造血干细胞能分泌微泡,应用细胞膜染液PKH-26标染微泡和细胞核染液Hoechst 33258标染PBMNC细胞核,再通过激光扫描共聚焦显微镜观察微泡能否进入PBMNC中;3.如果能进入,验证微泡能否改变受体细胞PBMNC的杀伤效应。研究结果:1.外周血造血干细胞采能分泌微泡;2.外周血造血干细胞微泡能进入PBMNC细胞中;3.初步验证了微泡能改变受体细胞PBMNC的杀伤效应。研究结论:1.首次证实了外周血造血干细胞可以分泌微泡;2.初步验证了外周血造血干细胞微泡可以改变受者细胞的生物学功能。
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