交变磁场下磁纳米载体介导的重组pEGFP-AFP-TK对裸鼠移植性肝癌细胞杀伤作用的研究

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目的:在前期实验证实纳米磁流体作为基因载体具有较高的转染效率的基础上,利用前期准备好的PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体和含有AFP启动子的自杀基因pEGFP-AFP-TK质粒,建立裸鼠移植性肝癌模型,在外加交变磁场的条件下,研究交变磁场对PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体转染pEGFP-AFP-TK自杀基因治疗肝癌的影响。方法:建立人原发性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分成空白对照组、磁场空白组、纯纳米磁流体组、纯pEGFP-AFP-TK自杀基因组和PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体介导的pEGFP-AFP-TK组5组。空白对照组不作任何处理;磁场空白组在磁场照射下不作任何处理;其余实验组分别于裸鼠肿瘤部位直接注射PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体、pEGFP-AFP-TK自杀基因和PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体转染的pEGFP-AFP-TK质粒,同时在裸鼠尾静脉注射更昔洛韦(GCV)。实验中的采用的脉冲磁场发生装置的频率为40kHz,磁场强度峰值为5kA/m,作用时间为15min/d,共15d,观察并记录7d、15d两个时段皮下肿瘤的生长情况并做病理学检查,用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)的表达量,用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞原位凋亡,用RT-PCR检测肿瘤鼠心,肝,肾的自杀基因表达情况。结果:裸鼠皮下成瘤率100%。7d和15d的时候,纳米磁流体转染的pEGFP-AFP-TK组的在肿瘤体积、重量、血清中AFP的含量以及肿瘤MVD均低于其他各组;在抑瘤率、细胞凋亡指数则明显高于其他组别;可见在外加交变磁场的作用下,纳米磁流体转染的自杀基因组对移植肝癌细胞的杀伤效果优于磁场空白组、纯纳米磁流体和纯自杀基因组。通过RT-PCR检测肿瘤鼠心、肺,肾部位自杀基因的表达较弱,而肿瘤组织细胞处自杀基因表达明显。结论:在交变磁场作用下,纳米磁流体转染的pEGFP-AFP-TK对移植型肝癌裸鼠模型的肝癌细胞具有明显的杀伤作用。一定强度的外加磁场对肿瘤的生长具有一定的影响,外加磁场可以作为治疗肝癌的一种辅助治疗手段,将局部靶向热疗和靶向基因治疗结合以达到更好的治疗效果。
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