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丙泊酚对脂多糖刺激人单核细胞分泌细胞因子的影响目的在LPS刺激人外周血单核细胞释放细胞因子的基础上,观察不同浓度的丙泊酚对LPS刺激引起的促炎细胞因子TNF-a、IL-6和抗炎细胞因子IL-10释放的影响,检测单核细胞表面TLR4的表达变化,探讨丙泊酚对细胞因子分泌的影响作用及其可能机制。方法1.通过密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,在塑料平皿中贴壁后获取细胞,通过瑞吉氏染色、非特异性酯酶染色和荧光标记的抗人CD14抗体鉴定获取的细胞,并测定细胞存活率。2.用RPMI1640培养基重悬细胞,置于48孔板,调整终浓度至5×105/500μl/孔,观察LPS刺激单核细胞产生细胞因子的量效和时效关系。1)观察LPS刺激单核细胞产生细胞因子的量效关系:用不同浓度（阴性对照、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml和1000ng/ml）LPS刺激单核细胞24h,离心收集上清,用ELISA法检测上清中TNF-a、IL-6和IL-10的浓度。2)观察LPS刺激单核细胞产生细胞因子的时效关系:用10ng/ml的LPS刺激单核细胞,在37℃、5%CO2孵箱中孵育2h、6h、12h、24h和48h后离心收集上清,检测细胞因子TNF-a、IL-6和IL-10的浓度。3.观察丙泊酚对LPS刺激单核细胞分泌细胞因子及TLR4表达的影响。1)察丙泊酚对LPS刺激单核细胞分泌细胞因子的影响:单核细胞分为空白对照组、LPS组、0.1%DMSO组、丙泊酚（100μg/ml）组和不同剂量的丙泊酚（1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、100μg/ml）+LPS组。按照上述分组加入不同剂量的丙泊酚和LPS,共培养24h后,离心收集上清,测上清中细胞因子TNF-a、IL-6和IL-10的浓度。2)观察丙泊酚对LPS刺激单核细胞后TLR4表达的影响;单核细胞分为空白对照组、LPS组、0.1%DMSO组、丙泊酚（100μg/ml）组和不同剂量的丙泊酚（1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、100μg/ml）+LPS组。按照上述分组加入不同剂量的丙泊酚和LPS,共培养24h后收集单核细胞,用荧光标记的抗CD14和抗TLR4抗体标记,流式细胞仪检测CD14和TLR4双阳性单核细胞百分率。结果1.通过密度梯度离心及贴壁法能获取单核细胞,纯度≥80%;台盼蓝拒染实验确定单核细胞存活率≥195%。2.1)随着LPS浓度的增加,细胞上清中TNF-a、IL-6和IL-10含量逐渐增加,LPS浓度在10ng/ml时,细胞因子均处在敏感可测的范围。2)随着LPS刺激时间的延长,细胞上清中TNF-a、IL-6和IL-10的浓度逐渐升高,并分别在6h、24h和24h达到峰值。3.1)相对于空白对照组,0.1%DMSO组和丙泊酚组上清中细胞因子没有明显变化,LPS刺激后细胞因子含量明显升高（P＜0.01）,丙泊酚呈剂量依赖性地抑制LPS刺激引起的TNF-a、IL-6和IL-10升高。2)相对于空白对照组,0.1%DMSO组和丙泊酚组细胞表面TLR4表达没有明显变化,LPS刺激后,细胞表面TLR4表达下调,丙泊酚使LPS刺激后TLR4的下调进一步加强。结论1.用10ng/mlLPS刺激单核细胞能引起细胞因子的释放。2.丙泊酚呈剂量依赖性地抑制LPS刺激单核细胞引起的细胞因子释放。3.丙泊酚能进一步降低LPS刺激后单核细胞表面TLR4的表达,抑制单核细胞TLR4的表达可能是丙泊酚抑制炎症反应的机制之一。