提高周血血管生成素1水平对造血干祖细胞的动员效应研究

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目的:造血干细胞移植(HSCT)是治疗白血病、淋巴瘤等恶性血液肿瘤、代谢性疾病、自身免疫性疾病等危害人类健康的最有效方法之一。动员足够的造血干/祖细胞(HSPC)从骨髓到外周血是进行外周血造血干细胞移植治疗的前提。目前各种细胞因子如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、化疗试剂以及趋化因子已广泛应用于HSPC动员,但是动员的HSPC仍不能满足临床治疗,而且HPSC动员机制尚未完全阐明,因此有必要对HSPC动员机制进行深入研究,才能开发更有效的动员试剂,更深入地理解HSPC动员的分子机制。方法:本研究以腺病毒为载体,通过合成基因重组血管生成素1(Ang1)腺病毒,以C57BL/6小鼠为研究对象,予小鼠尾静脉注射重组腺病毒,采用酶联免疫吸附试验(ELISA).流式细胞术、血细胞计数、造血祖细胞集落培养等实验方法检测注射重组Angl腺病毒及空白载体的小鼠周血,观察注射腺病毒后小鼠周血血清中Angl浓度、Lin- Sca-1+c-kit+(LSK)细胞比例、白细胞数以及集落形成单位(CFU)的变化,研究提高周血Angl浓度对HSPC的动员效应。结果:1、所包装的重组腺病毒的滴度为1010pfu/ml;重组腺病毒转染293T细胞后,荧光基因GFP能够正常表达,培养上清含Angl蛋白。2、注射重组Ang1腺病毒后,小鼠周血血清Angl的浓度呈逐步升高,至d14上升较快,d14、d21、d28、d35、d42较d0均明显升高,差别有统计学意义(P<0.05);注射重组Angl腺病毒后,小鼠骨髓液Angl的浓度变化不明显,d1-d28均在基线值上下徘徊,d35、d42较基线值升高,d42与d0对比明显升高(P<0.05)。3、注射重组Ang1或空病毒腺病毒后,周血白细胞均升高,以注射PSC组(d0)小鼠周血WBC作为基线值(5.38+2.32)x109/L,注射重组Angl腺病毒后小鼠周血WBC升高,至d14处于最高点(13.07±1.26)x109/L(P=0.02),d7-d42均较d0高(P<0.05),但至d42时仍没有将至基线值;注射阴性对照病毒,小鼠周血WBC也上升,d28达峰值(13.52±3.00)x109/L(P=0.021),d7-d35均较d0高(P<0.05),d42增高不明显(P=0.698)。4、注射不同重组腺病毒后对小鼠有无动员效应,流式细胞术检测LSK细胞占有核细胞的比例,注射PBS组(d0)即基线值为(0.0561±0.013)%,注射重组Ang1腺病毒组,d14处于最高值,d7-d21均较d0组升高(P<0.05);注射空腺病毒后,d10达到最高值(0.1071±0.026)%,d10-d21均较d0升高(P<0.05)。注射重组Ang1腺病毒与空腺病毒同一时间点比较,Ab-Ang1 d10、d14、d21 LSK细胞占有核细胞的比例均较Ab-CTL的高(P<0.05)。5、取了d14时间点,行造血祖细胞培养,注射重组Ang1腺病毒实验组克隆形成单位(CFU)为8.16+4.62/1x105MNC较PBS组3.0+3.35/1X105MNC多,差异有统计学意义(P=0.002<0.05),及注射空白载体组4.00±2.82/1x105MNC多,差异有统计学意义(P=0.009<0.05),空白载体组较PBS组高,但差别无统计学意义(P=0.511)。结论:通过注射重组Ang1腺病毒,提高周血血清Ang1的浓度,可以动员造血干/祖细胞。
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