【摘 要】
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目的本研究通过检测miRNA-182在肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）和癌旁组织中的表达水平及其与HCC临床资料的关系,探究miRNA-182在肝癌和正常组织中表达量是否存在差异;转染使miRNA-182高表达及低表达,通过体外细胞功能实验,研究miRNA-182在肝癌细胞SMMC-7721中的生物功能作用及其潜在机制,为肝癌治疗寻找新的生物学靶点提供依据。方法
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目的本研究通过检测miRNA-182在肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）和癌旁组织中的表达水平及其与HCC临床资料的关系,探究miRNA-182在肝癌和正常组织中表达量是否存在差异;转染使miRNA-182高表达及低表达,通过体外细胞功能实验,研究miRNA-182在肝癌细胞SMMC-7721中的生物功能作用及其潜在机制,为肝癌治疗寻找新的生物学靶点提供依据。方法1.通过收集临床中诊断为肝癌患者的手术标本,将其分为癌组织组和癌旁组织组,采用Trizol法提取组织的总RNA,逆转录后进行qRT-PCR检测,统计分析miRNA-182在73对HCC癌组织和癌旁组织中的表达差异,及其表达水平与HCC患者的临床资料的关系,计算资料采用卡方检验,计量资料采用T检验。2.体外进行肝癌细胞SMMC-7721培养,应用基因转染技术,利用miRNA-182模拟物mimic和抑制剂inhibitor对SMMC-7721肝癌细胞进行转染,以转染后miRNA-182 mimic和miRNA-182 inhibitor的肝癌细胞做为实验组,已转染后mimic NC和inhibitor NC的肝癌细胞作为对照组。通过MTT细胞增殖实验验证高表达及低表达miRNA-182对SMMC-7721肝癌细胞增殖能力的影响;通过细胞划痕修复实验和Transwell迁移实验等检测技术验证miRNA-182对细胞横向和纵向迁移能力的影响;通过Transwell侵袭实验检测转染miRNA-182后的侵袭能力的变化。结果1.miRNA-182在肝癌组织和癌旁组织中的表达分析结果显示,miRNA-182在肝癌组织中的表达水平高于在癌旁组织中的表达水平,差异具有统计学意义（P<0.05）。2.miRNA-182的表达水平与肝癌的临床病理特征的分析结果显示,miRNA-182表达的高低与甲胎蛋白（AFP）水平相关（P<0.05）。3.转染miRNA-182模拟物mimic和抑制剂inhibitor后,与对照组mimic NC中miRNA-182表达水平相比,转染后miRNA-182 mimic的SMMC-7721肝癌细胞中miRNA-182表达水平明显增高;而转染后miRNA-182 inhibitor的SMMC-7721肝癌细胞中miRNA-182的表达水平比转染后miRNA-182inhibitor NC的SMMC-7721肝癌细胞中miRNA-182的表达水平低,差异有统计学意义（P<0.05）。4.MTT细胞增殖实验显示,转染过miRNA-182 mimic的肝癌细胞SMMC-7721的细胞活性较转染过mimic NC的肝癌细胞SMMC-7721的细胞活性高,差异具有统计学意义（P<0.05）;转染过miR-182 inhibitor的肝细胞癌SMMC-7721的细胞活性较转染过inhibitor NC的肝细胞癌SMMC-7721低,差异具有统计学意义（P<0.05）。5.细胞划痕修复实验和Transwell迁移实验结果显示,与转染过mimic NC的肝癌细胞SMMC-7721相比,转染过miRNA-182 mimic的肝癌细胞SMMC-7721的细胞修复能力较差,细胞迁移数目较多,差异具有统计学意义（P=0.045;P=0.001）;转染过miR-182 inhibitor的肝细胞癌SMMC-7721的细胞修复能力和细胞迁移数目较转染过inhibitor NC的肝细胞癌SMMC-7721少,差异具有统计学意义（P=0.027;P<0.000）。6.Transwell侵袭实验结果显示,转染过miRNA-182 mimic的肝癌细胞SMMC-7721穿过小室的细胞数目较转染过miRNA-182 mimic的肝癌细胞SMMC-7721的细胞数目多,差异具有统计学意义（P<0.000）;转染过miR-182 inhibitor的肝细胞癌SMMC-7721穿过小室的细胞数目较转染过inhibitor NC的肝细胞癌SMMC-7721少,差异具有统计学意义（P<0.000）。结论miR-182在肝癌组织中表达水平明显高于癌旁组织,在肿瘤的发生发展中可能扮演着促进癌症的发展的作用。上调miR-182的表达可增强肝癌细胞系SMMC-7721的增值、迁移、侵袭能力。miR-182有望成为肝癌新的肿瘤标志物和治疗靶点,为肝癌发展的分子机制提供新的理论。
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