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研究背景肾细胞癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,每年在全球范围内约造成10万人死亡,分别占男女恶性肿瘤的5%和3%。肾细胞癌是起源于肾实质泌尿小管上皮细胞的一种恶性肿瘤,可分为多种细胞亚型,其中肾透明细胞癌是最为常见的病理类型。尚无针对肾癌的简便、经济的筛查手段;目前肾癌的术前诊断主要依靠影像学检查,但影像学检查有时难以确定肾脏肿瘤的良恶性;确诊主要依靠术后组织病理学检查。肾癌的治疗仍以肾根治性切除术、肾部分切除术等微创手术为主;术后缺乏经济有效的辅助治疗手段。虽然细胞因子治疗已应用于临床数年,但因其副作用大、有效率低,有时难以取得满意的疗效。大约有40%的肾癌患者术后出现肿瘤的复发及转移,且转移性肾癌患者的预后很差,五年生存率只有10%左右。虽然目前已有针对转移性肾癌的靶向治疗药物,能将患者的总生存时间提高数月;但其费用高昂,长时间应用还存在耐受性差、耐药性强的问题。因此迫切需要研究新的分子生物靶点来指导早期诊断和后续治疗。长链非编码RNA(lncRNA)是长度超过200个核苷酸且不能编码蛋白质的一类RNA。既往被认为是转录噪音。近年来随着二代测序技术的普及和相关研究技术的成熟应用,lncRNA已被发现在多种生理和病理过程中发挥着重要作用。长链非编码RNA—linc00645是一种基因间lncRNA,定位于人类染色体14q12。其表达具有组织特异性,在正常肾组织的表达量远高于其他组织器官。既往文献报道其在肾癌透明细胞癌组织中表达较正常肾实质明显下调。但其在肾癌中的具体作用机制仍不清楚。研究目的通过细胞功能实验及下游机制研究,阐明linc00645对肾透明细胞癌细胞的具体影响及其作用机制。方法1.分析TCGA及GTEx数据库中linc00645的表达情况。2.收集我院2015年～2017年泌尿外科收治的肾癌患者临床信息、肾癌肿瘤及癌旁正常组织标本,进行PCR实验,验证linc00645在肿瘤组织及瘤旁正常组织中的表达情况。3.使用786-O、ACHN两种细胞系验证linc00645的亚细胞定位。4.进行CCK-8实验验证linc00645过表达后对肾透明细胞癌细胞增殖的影响。5.通过Annexin V-PI双染色流式细胞术探究linc00645过表达后对肾透明细胞癌细胞凋亡的影响。6.通过transwell实验验证linc00645过表达后对肾透明细胞癌细胞迁移的影响。7.进行CHIRP-MS实验探究linc00645的RNA结合蛋白。8.进行PCR和WB实验,探究linc00645过表达后对下游PKM2 mRNA及蛋白表达的影响。结果1.Linc00645的表达具有组织特异性,在肾脏中表达远高于其他正常组织器官。其表达在肾透明细胞癌组织中较瘤旁正常组织显著降低。2.Linc00645在肾透明细胞癌细胞的细胞核及细胞质中均有分布。3.Linc00645过表达能显著抑制786-O、ACHN细胞的增殖和迁移,并促进细胞凋亡。4.Linc00645能够与ENO1、LDHA、PKM2等48种蛋白形成特异性结合。5.Linc00645过表达可抑制PKM2蛋白的表达。结论Linc00645在肾透明细胞癌组织中较癌旁正常组织表达减少,在细胞核、质中均有分布。Linc00645可降低肾透明细胞癌细胞中PKM2的表达,抑制肿瘤细胞的增殖、迁移,并促进细胞凋亡,从而发挥肿瘤抑制作用。Linc00645可为肾透明细胞癌的诊断提供参考,linc00645和PKM2有望作为肾透明细胞癌的治疗靶点。