猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起，以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸疾病为特征，是危害世界养猪业最严重的疫病之一。我国于1995年首次暴发此病，2006年再次暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征（highly pathogenic PRRS, HP-PRRS），此病在各年龄猪群中发病率和死亡率都显著升高，但是对于HP-PRRSV致病性增强的机制至今尚未完全清楚。本研究利用蛋白质组学技术研究和分析不同致病性PRRSV感染宿主细胞后细胞内蛋白的变化，寻找与PRRSV致病性相关的分子因素。首先我们对PRRSV强、弱毒株在PAM和Marc-145细胞上的增殖特性进行了比较研究。细胞病变观察和间接免疫荧光检测结果显示，二者在体外均可以感染PAM细胞，其中强毒HuN4株感染PAM细胞CPE较为明显。比较HuN4株与HuN4-F112株在PAM细胞和Marc-145细胞的生长曲线，结果显示强、弱毒在PAM细胞和Marc-145细胞生长趋势存在明显差异，其中强毒HuN4株在PAM细胞上增殖能力明显强于弱毒株，而弱毒HuN4-F112株在Marc-145细胞上的增殖能力明显强于其在PAM细胞上的增殖能力，表明PRRSV强毒株对靶细胞PAM的感染能力较强，弱毒株对其感染能力相对较弱，这为深入了解PRRSV强、弱毒株的致病性差异奠定了基础。在体外，我们分别用103TCID50强毒HuN4株和弱毒HuN4-F112株接种PAM细胞，感染后48h收集细胞总蛋白，进行荧光双向差异凝胶电泳（2D-DIGE）分析，结果表明，153个蛋白点的表达量存在显著性差异（p<0.01），同时完成了其中32个差异表达蛋白点的质谱分析，并应用Blast2GO软件对其进行了基因注释和功能分类，注释后的已知基因功能短语被分为三大类，分别为生物学加工(65.1%)、分子功能(16.3%)和细胞成分(18.6%)。其后我们利用荧光定量RT-PCR方法对部分蛋白转录水平的变化进行了验证，结果显示，HuN4株感染后PKM2呈上调表达，而HuN4-F112株感染后则为下调表达，推测强毒HuN4株感染后PKM2上调表达可以为病毒复制提供充足的能量，进而有利于强毒株的复制。HSBP1在HuN4株感染后呈上调表达，HuN4-F112株感染后呈下调表达，推测HuN4株感染后该蛋白上调表达抑制了PAM细胞凋亡，进而有利于强毒株在细胞内的大量复制。PARK7在HuN4-F112株感染后上调表达，推测其可能与HuN4株、HuN4-F112株引起不同程度的病理变化有关。PMSA6在HuN4株感染后上调表达，在HuN4-F112株感染后下调表达，我们推测该蛋白的差异表达可通过参与UPP通路使HuN4株和HuN4-F112株在PAM细胞上的复制能力表现为不同。同样，我们用103TCID50的强毒HuN4株和弱毒HuN4-F112株分别接种Marc-145细胞，感染后48h收集细胞总蛋白，然后进行2D-DIGE和质谱分析，结果表明，我们成功鉴定了46个显著性差异表达蛋白（p<0.01）。应用Blast2GO软件进行了基因注释和功能分类，注释后的已知基因功能短语被分为生物学加工、分子功能和细胞成分三大类。利用蛋白质印迹进一步验证了差异表达蛋白的变化，结果表明，hnRNPK在HuN4-F112株感染后明显下调表达，而HuN4株感染后则略有下调，我们推测hnRNPK的差异表达与PRRSV强/弱毒在Marc-145细胞上的复制能力不同相关。HSPA9在HuN4-F112株感染后呈明显下调表达，而HuN4株感染后则略有上调表达，我们推测其可能与强/弱毒株引起Marc-145细胞凋亡的时间和程度不同有关。HuN4-F112株感染后CRT呈明显下调表达，而HuN4株感染后则下调趋势不明显，我们推测CRT的差异表达可能与强/弱毒的复制能力不同相关，进一步将CRT进行过量表达，结果我们首次通过试验证实过量表达的CRT能够明显抑制PRRSV的强/弱毒在Marc-145细胞上的复制，且该抑制能力呈剂量依赖性。通过上述研究，我们成功筛选和鉴定了强毒HuN4株与弱毒HuN4-F112株感染PAM细胞和Marc-145细胞后的差异表达蛋白，分析了部分差异表达蛋白与PRRSV强/弱毒之间致病能力不同的相关性，这为今后研究PRRSV强/弱毒株与宿主细胞之间的分子致病机制增添了新的数据信息。