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绒山羊毛囊发育过程具有时空特异性,在发育的不同时期,受到多种因子的调控作用。课题组前期对不同时期绒山羊皮肤组织的RNA-seq测序分析发现,Dsg4基因在不同时期差异表达,而且已有的研究发现与毛囊发育相关的关键转录因子HOXC13和FOXN1调控Dsg4基因的表达,但该基因的功能及调控机制尚未见报道。因此,本研究基于绒山羊毛囊发育不同时期的皮肤组织测序数据,结合MTT、Ed U及荧光定量PCR(RT-q PCR)等技术,探究Dsg4基因对绒山羊毛乳头细胞增殖的影响,并利用双荧光素酶报告实验和染色质免疫共沉淀技术(Ch IP)探究HOXC13和FOXN1对Dsg4的调控作用。获得的结果如下:1、利用RT-q PCR技术检测Dsg4基因在绒山羊毛囊发育不同时期皮肤组织中的表达情况,结果表明:Dsg4基因在绒山羊毛囊发育生长期的表达量显著高于休止期(P<0.05);在胚胎期120天的表达量极显著高于胚胎期66天(P<0.01)。2、构建Dsg4基因过表达载体并进行腺病毒包装后侵染毛乳头原代细胞,MTT检测发现,与对照组相比,过表达Dsg4基因后毛乳头细胞的活力极显著降低(P<0.01)。Ed U实验进一步发现,过表达Dsg4基因后增殖的细胞比例显著降低,表明Dsg4基因抑制毛乳头细胞的增殖。3、酵母双杂交结果表明HOXC13与FOXN1之间存在相互作用,同时双荧光素酶报告实验发现,在HOXC13和FOXN1的共同作用下,Dsg4基因启动子的活性极显著的提高(P<0.01),表明两个转录因子之间能够结合形成共激活因子,从而正向调控靶基因。另外,本研究在Dsg4的启动子区转录起始位点上游-1078 bp和-349 bp处预测到HOXC13的两个结合位点,利用Ch IP技术富集到HOXC13结合的DNA序列后,通过PCR方法,在-349 bp位点扩增出特异的条带,表明HOXC13作为基础转录因子能够结合在Dsg4基因的启动子区。本研究对绒山羊Dsg4基因在毛囊发育不同阶段的表达特征、功能和调控机制进行了研究,为阐述绒山羊毛囊发生发育的分子调控机制及绒山羊的分子育种提供了理论依据。