据估计,全世界携带有乙肝病毒(HBV)的人群约有3.5亿人,中国约有1.2亿左右.持续性乙肝病毒感染会诱发进一步的肝硬化和原发性肝癌.乙肝病毒在体内存在的时间越长,就越易导致肝硬变、肝癌.因此研究乙肝病毒诱发疾病的诊断和治疗具有很重要的意义.热休克蛋白gp96,又称grp94,是热休克蛋白hsp90家族中的成员,可以携带细胞中的肿瘤或病毒抗原肽而引发肽特异的T细胞免疫反应.gp96主要位于细胞内质网膜,少量位于某些癌细胞的表面.先前有报道gp96在肿瘤细胞包括原发性肝癌细胞中表达大为上调,但gp96表达程度与HBV诱发的慢性乙肝,肝硬化和原发性肝癌病程进展之间的关系并未见报道.许多原发性肝癌是由于乙肝病毒持续性感染造成慢性乙肝继而肝硬化,最终发展为肝癌,因此我们设计了免疫组化实验分析了gp96的表达水平和HBV诱发疾病从慢性乙肝感染,到肝硬化和肝癌之间的关系.我们比较了77例慢性乙肝,27例肝硬化和30例原发性肝癌病人的组织切片中蛋白的表达差异.另采用Western blotting的方法,对几个肝癌细胞系和胎肝细胞系分析了gp96的表达.结果发现gp96表达程度的提高与HBV诱发疾病的病程密切正相关,其中慢性乙肝表达最低,肝硬化为中度,而肝癌为最高.gp96的上调表达,可以作为一个有价值的诊断或预测标志物应用于乙肝病毒诱发疾病.持续性乙肝病毒感染经常导致慢性化、肝硬化和肝细胞癌的发展.目前使用的治疗乙型肝炎的药物包括α-干扰素疗效均不太好.基于核酸水平的抗病毒肝炎基因治疗具有很强的应用前景.大量研究表明人乙肝病毒前核心蛋白或其突变体无论在细胞水平还是转基因动物实验上均可以抑制野生型病毒的复制,在此研究成果上,我们通过定向PCR的方法将人乙肝病毒的前核心蛋白基因克隆于新型四环素调控表达质粒中,构建了pCMVtetOprecore载体,在中国人肝癌细胞系SSMC-7721中进行了瞬间表达分析,并构建稳定表达tetR的SSMC-7721细胞系,在此中完成调控表达分析.结果证明此调控系统对HBV前核心蛋白的表达有很好的控制性,这为开展反式显性负调蛋白的乙型肝炎基因治疗打下了很好的基础.