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研究背景:抑郁症是长期以来对人们思想、情绪有负面影响的一种慢性疾病。它具有情绪低落、苦恼悲伤、认知功能障碍、无快感体验等特点。抑郁症会损害认知和社交功能,导致人们无法正常享受生活。重度抑郁症（major depressive disorder,MDD）有厌世或自杀的念头。当前,现有的抗抑郁药物远远不能满足病人的需求,因此,许多抗抑郁作用稳定、有效率高、不良反应较轻的中药活性成分引起了很多中外学者的注意。灵芝是云南十大名贵药材之一,具有很强的药效作用。研究发现,灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP）是从灵芝中提取的具有生物活性组分之一,具有抗癌、抗氧化、免疫调节等多种药理作用。经过多年的研究发现,神经炎症在抑郁症的发病机制中具有很重要的作用。多项研究表明,GLP对脑缺血、癫痫等中枢神经疾病有很强的神经保护作用。灵芝多糖具有抗炎和免疫调节的作用在抑郁症方面的研究却未见报道,本研究拟应用于对抑郁症治疗作用的研究。研究方法:以6-7周龄C57BL/6J小鼠为研究对象,以生理盐水为阴性对照（Control,CON）,丙咪嗪（Imipramine,IMI 15mg/kg）为阳性对照。设置 GLP 1、5、12.5mg/kg三个剂量组,腹腔注射60分钟后,进行悬尾实验（Tail Suspension Test,TST）,3 天后进行旷野实验（Open Field Test,OFT）,5 天后进行强迫游泳实验（Forced Swim Test,FST）,以此评价GLP的抗抑郁效果。通过前期实验结果选取最佳剂量GLP 5mg/kg,进一步在慢性社交挫败应激（Chronic Social Defeat Stress,CSDS）模型诱导的抑郁样小鼠上处理后,进行TST和FST等动物行为学方法来评价GLP在CSDS模型小鼠上的抗抑郁效果。之后,利用相关分子实验技术进行检测。提取小鼠海马体的蛋白质,通过Western blot检测Dectin-1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3,NLRP3）、白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、脑源性神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor,BDNF）、凋亡相关的包含 CARD 斑点样蛋白（Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC）、核因子 kappa B p65（Nuclear factor kappa Bp65,NF-κBp65）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-10（Interleukin-10,IL-10）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1（cysteinyl aspartate-specific protease-1,caspase-1）、α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体（amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid receptor,AMPAR）等蛋白分子的表达情况。使用免疫荧光染色技术检测小鼠大脑海马体中小胶质细胞和星形胶质细胞的相关表达情况。最后,使用Dectin-1受体拮抗剂Laminarin在CSDS动物模型中进一步研究了 GLP是否通过上调Dectin-1受体而产生抗抑郁作用。研究结果:（1）在第一天（GLP 1、5、12.5mg/kg）给药60分钟后的TST以及连续给药5天后的FST结果显示,相对于CON组来说,GLP显著降低了 TST（p＜0.05）和FST（P＜0.001）小鼠的不动时间,且与药物剂量相关。其中5 mg/kg GLP给药组降低的不动时间是最低的,表明该浓度为抗抑郁效果的最佳浓度。各组小鼠连续注射生理盐水、丙咪嗪、低中高浓度的GLP在5天内的体重变化情况显示,在GLP给药期间的体重变化并没有统计学差异。在OFT中的统计结果表明GLP不会引起小鼠运动异常行为。（2）经过CSDS造模10天的易感型C57BL/6J小鼠,经糖水偏好性实验（Sucrose preference test,SPT）检测,CSDS造模组小鼠对糖水感受能力下降,快感缺失,表现出典型抑郁症状。设置CON组,CSDS模型组,GLP给药组（最佳剂量5 mg/kg GLP+CSDS模型小鼠）。TST和FST实验结果显示,和CON组相比,腹腔注射60分钟或5天后,CSDS模型组小鼠不动时间增加,具有显著性差异。然而,GLP治疗组静止不动时间显著降低,表现出显著的抗抑郁作用,表明GLP具有良好的抗抑郁效果。（3）提取小鼠海马区的蛋白,Western blot结果显示,GLP显著性地增加了Dectin-1的表达水平（p＜0.001）,此外,TST结果表明特异性拮抗剂Laminarin能有效地阻断GLP的抗抑郁作用（p＜0.05）。此外,与CON组相比,CSDS模型组小鼠海马区的NF-κBp65、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β的蛋白表达水平上调,具有显著性差异,而GLP给药组NF-κBp65、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β的蛋白表达水平下调,恢复其正常表达水平。最后,还检测了相关促炎和抑炎因子的表达,相对于CON组,CSDS模型组小鼠海马区的IL-6和TNF-α（p＜0.01）表达升高,GLP给药组逆转CSDS诱导的IL-6和TNF-α的上调,恢复其正常表达水平。CSDS模型组小鼠海马区的IL-10（p＜0.001）和BDNF（p＜0.001）表达降低,GLP逆转CSDS诱导的抗炎细胞因子IL-10和BDNF的下调。（4）提取小鼠海马区的蛋白,Western blot结果显示,与CON组相比,CSDS模型组GluA1S845位点磷酸化水平、GluA1、GluA2表达水平显著性降低,GLP给药组显著性地增加了 CSDS抑郁样小鼠GluA1S845位点磷酸化水平、GluA1、GluA2的表达水平。免疫荧光显示,与CON组相比,CSDS模型组小鼠海马区的小胶质细胞显著增加。而GLP处理显著减少了 CSDS诱导的小胶质细胞数量。此外,星形胶质细胞也呈现出相同的变化趋势。研究结论:本研究发现了 GLP是一种有较好潜力研发出快速且相对安全的抗抑郁药的多糖化合物,它能抑制神经炎症和增强AMPA受体兴奋性。这为临床上治疗MDD患者提供了一种新的靶点和潜在的候选化合物。