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目的人巨细胞病毒(HCMV)是一种普遍存在的病原体,可在免疫功能低下的人群中引起疾病。HCMV的ie2基因在病毒感染后立刻表达,翻译生成IE86蛋白,其在调节病毒复制中起着重要作用,并且研究表明IE86与胶质瘤的恶性转化有关,但关于其致病机制尚未有明确的阐述。HnRNP A2/B1是一种剪接因子,参与调节多种基因的选择性剪接过程,如凋亡相关基因bcl-x。HnRNP A2/B1已被证明在许多肿瘤细胞中外源性过表达,包括神经胶质瘤细胞U251。神经胶质瘤是最常见的恶性原发性恶性脑肿瘤之一,起源于中枢神经系统。先前的研究已经证明了IE86可以促进胶质瘤细胞的恶性增殖,但其中的机制还尚未清楚。本研究选用神经胶质瘤细胞U251,旨在建立能够稳定外源性过表达HCMV-IE86的U251细胞,深入探索HCMV-IE86影响神经胶质瘤的分子机制,以及剪接因子hnRNP A2/B1在此过程中介导的作用,为感染HCMV患者的神经胶质瘤的治疗寻找另一靶点。方法1.利用脂质体转染pEGFP/IE86于U251细胞,并且提取mRNA和蛋白,分别做RT-PCR和Western Blot鉴定IE86是否外源性过表达。2.利用免疫共沉淀联合质谱鉴定U251细胞中IE86免疫复合物成分。3.利用RT-PCR鉴定转ie2小鼠,提取小鼠脑组织的mRNA和蛋白,通过RT-PCR和Western Blot检测hnRNP A2/B1在ie2阳性鼠和阴性鼠以及外源性过表达IE86和正常U251细胞中的表达差异。4.在U251细胞中通过shRNA抑制hnRNP A2/B1基因表达,并检测敲低后hnRNP A2/B1 mRNA、蛋白水平。5.RT-PCR,Western blot检测在外源性过表达IE86细胞敲低hnRNP A2/B1后bcl-x基因剪接情况6.流式细胞仪,CCK8等检测在外源性过表达IE86细胞敲低hnRNP A2/B1细胞增殖和凋亡能力以及利用Western Blot检测caspase3的表达情况。结果1.成功建立能够稳定外源性过表达IE86的U251细胞系。2.鉴定出IE86免疫复合物成分,与IE86有相互作用的剪接因子8个。3.相较于阴性小鼠,hnRNP A2/B1在转ie2基因小鼠的表达水平更高,同样的,相较于正常U251细胞,外源性过表达IE86细胞中的hnRNP A2/B1的表达水平更高。4.成功在U251细胞中通过shRNA敲低hnRNP A2/B1,敲低后hnRNP A2/B1的表达水平显著降低。5.敲低hnRNP A2/B1后,与正常U251细胞相比,增加了bcl-xs/Bcl-x S的表达量,降低了bcl-xl/Bcl-xL的表达量。而在外源性过表达IE86的细胞中下调hnRNP A2/B1,与仅外源性过表达IE86的细胞相比,显著降低了IE86对于bcl-xs/bcl-xl、Bcl-x S/Bcl-xL的表达量的影响。6.敲低hnRNP A2/B1后,与正常U251细胞相比,细胞增殖下降,凋亡增加,caspase3表达量增加。而在外源性过表达IE86的细胞中下调hnRNP A2/B1,与仅外源性过表达IE86的细胞相比,显著降低了细胞增殖率,增加了凋亡率,caspase3表达量上升。结论IE86与hnRNP A2/B1相互作用,并且IE86可以通过促进hnRNP A2/B1的表达从而促进胶质瘤细胞的增殖以及抑制细胞凋亡。