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研究背景: 结直肠癌(Colorectalcancer)全球最常见的消化系统恶性肿瘤之一,在全世界癌症发是病率中位居第三位,死亡率位居第四位。我国结直肠癌的发病率和死亡率均呈缓慢上升趋势,已成为危害人民健康的主要恶性肿瘤之一。尽管现有的医疗技术取得巨大的进展,但晚期结直肠癌患者的生存率仍较差,晚期结直肠癌患者5年生存率仍低于11%。因此,找到能早期判断出高危患者的检测手段尽早治疗,降低患者手术后复发率,对提高晚期结直肠癌患者生存期具有重要的临床意义。 人类Ras-convertingenzyme1(RCE1)的主要功能是对末端为CAAX模体蛋白的最后三个氨基酸进行水解。以CAAX模体结尾的蛋白包括核纤层蛋白,Ras超家族蛋白等。他们参与调控细胞的增殖、分化、肿瘤形成等过程。本研究旨在探讨RCE1与结直肠癌的预后意义及其相关分子机制。 研究目的: 1、明确RCE1蛋白在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达情况; 2、探讨RCE1蛋白表达对结直肠癌患者术后复发的预测价值; 3、初步探讨RCE1蛋白在结直肠癌侵袭中可能的分子机制; 材料与方法: 1、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测244例结直肠癌及其癌旁组织中RCE1蛋白的表达情况。 2、通过Kaplan-Meier法和log-rank检验分析RCE1蛋白的表达与结直肠癌患者预后的相关性。 3、选择二株结直肠癌细胞株,通过慢病毒转染干扰RCE1基因的表达,通过qRT-PCR法检测RCE1干扰效率。再通过Westernblot法检测干扰前后RCE1和磷酸化MAPK家族白的表达情况。 4、Transwell侵袭小室实验方法检测干扰RCE1表达后结直肠癌细胞侵袭能力的变化。 5、IHC检测结直肠癌组织中RCE1蛋白和磷酸化MAPK家族蛋白表达情况,用Kaplan-Meier法和log-rank检验磷酸化MAPK家族蛋白与结直肠癌患者预后之间的关系。并通过卡方检验明确RCE1与磷酸化MAPK家族之间的相关性。 实验结果: 1、RCE1在结直肠癌组织中的表达较其癌旁组织中明显减低,结直肠癌组织中RCE1表达率为56.6%(138/244),而癌旁组织中RCE1表达率为77%(188/244)。结果显示,癌旁组织中RCE1蛋白表达率明显高于肿瘤组织(P<0.01)。 2、RCE1表达与结直肠癌患者预后的相关性分析,Kaplan-Meier生存分析表明肿瘤组织中RCE1高表达提示患者的预后良好,肿瘤组织中RCE1高表达的结直肠癌患者其5年总体生存率与无瘤生存率较RCE1低表达的结直肠癌患者明显高,具有统计学意义(p<0.001)。 3、卡方检验分析得出RCE1与肿瘤的的侵袭相关,通过shRNA干扰RCE1表达后结直肠癌细胞的侵袭能力明显增强。 4、Kaplan-Meier生存分析表明结直肠癌组织中磷酸化p-38高表达提示患者的预后良好,并且结直肠癌组织中RCE1的表达水平与p-38表达成正相关,而与磷酸化Erk1/2、JNK无明显相关。 结论: 1、RCE1在结直肠癌组织中呈低表达,明显低于癌旁组织。 2、结直肠癌组织中RCE1高表达的患者预后良好。 3、结直肠癌中RCE1通过MAPK家族中的p38途径抑制结直肠癌的侵袭,而与Erk1/2、JNK无明显相关。