【摘 要】
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目的:本研究旨在观察高糖条件下过表达PTEN、NF-κB后对GSDMD及GSDMD介导的小鼠肾小管上皮细胞焦亡相关蛋白的影响。方法:（1）细胞实验:为验证高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞中PTEN、NF-κB对焦亡相关蛋白Caspase-1 p20、GSDMD-N的调控作用。构建PTEN过表达质粒、NF-κB过表达质粒、GSDMD敲低质粒,并设置空载对照组,分别在正常糖（5.5mmol/L）和高糖（2
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目的:本研究旨在观察高糖条件下过表达PTEN、NF-κB后对GSDMD及GSDMD介导的小鼠肾小管上皮细胞焦亡相关蛋白的影响。方法:（1）细胞实验:为验证高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞中PTEN、NF-κB对焦亡相关蛋白Caspase-1 p20、GSDMD-N的调控作用。构建PTEN过表达质粒、NF-κB过表达质粒、GSDMD敲低质粒,并设置空载对照组,分别在正常糖（5.5mmol/L）和高糖（25mmol/L）条件下转染肾小管上皮细胞,培养48小时后收集细胞用于实验,具体分组为:PTEN过表达组、NF-κB过表达组、NF-κB过表达+GSDMD敲低组,通过Western Blotting检测肾小管上皮细胞中PTEN、NF-κB（P65、p-P65）、Caspase-1 p20、GSDMD-N的蛋白表达水平。最后通过双荧光素酶报告基因检测NF-κB对GSDMD转录活性的影响。（2）通过在线数据库分析人糖尿病肾组织中PTEN、NF-κB及GSDMD的表达情况:通过GEO全球数据库,采用生信数据分析的方法,统计了与糖尿病肾病相关的基因表达谱数据（GSE96804）,利用GEO2R筛选糖尿病肾病肾组织和肾切除正常肾组织之间的差异表达基因,初步分析了糖尿病肾病组织中PTEN、NF-κB、GSDMD的表达情况。结果:（1）与NG组相比,HG组中NF-κB p-P65蛋白表达明显升高、PTEN蛋白表达明显降低,GSDMD-N、GSDMD、Caspase-1 p20的表达明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05,n=3）。高糖条件下过表达PTEN后,PTEN的蛋白表达增加,NF-κB p-P65的蛋白表达随之降低,GSDMD-N、GSDMD、Caspase-1 p20的表达明显下调,差异有统计学意义（P＜0.05,n=3）。（2）高糖条件下过表达NF-κB P65,NF-κB P65及NF-κB p-P65蛋白表达水平明显高于空载对照组,GSDMD-N、GSDMD、Caspase-1 p20的表达明显上调,差异有统计学意义（P＜0.05,n=3）。（3）双荧光素酶报告基因检测到NF-κB可以在GGGAATTCCC位点增强GSDMD的转录活性,PROMO及JASPAR两个网站都未预测到PTEN与GSDMD启动子区存在靶向结合位点,且PTEN不是转录因子,故PTEN不能直接调控GSDMD的表达。（4）生物信息学分析提示NF-κB和GSDMD在糖尿病肾病患者肾组织中均出现了升高,而PTEN的表达是下降的。结论:（1）PTEN可以抑制NF-κB P65的活化。（2）NF-κB P65可以直接增强GSDMD的转录活性,而PTEN不能直接调控GSDMD蛋白,可能对GSDMD蛋白存在间接调节作用。
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