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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染及其相关疾病严重影响人类健康,同时也使患者家庭及社会承受着巨大的经济负担。目前针对 HBV 感染仍未找到可以根治的药物。当前临床上广泛使用的抗 HBV 感染药物包括干扰素和核苷类似物,但是这两类药物都存在不同程度的副作用并且均不能彻底清除患者体内的HBV,尤其对HBV表面抗原(hepatitis B surface protein,HBsAg)的清除作用微弱,而 HBsAg的表达是造成 HBV免疫耐受的关键因素之一[1],因此寻找能够抑制HBsAg的药物将是未来抗HBV治疗的重中之重。 以生物技术药物为主要手段的抗 HBV治疗是当前研究热点之一,如DNA疫苗、核酶、反义核酸、RNA 干扰(RNA interference,RNAi)、抗体药物和Dominant negative突变体(DN突变体)等。本研究就核酸技术在抗 HBV感染中的应用进行探讨： 目的：研究靶向c-Raf-1基因反义核酸和CpG-ODN 1826体内外抗HBV的活性,并对其作用机制进行初步的探讨。 方法：1. 通过 HepG2.2.15 细胞瞬时转染反义核酸药物,在细胞水平验证靶向c-Raf-1基因的反义核酸药物是否具有抗HBV活性；通过细胞活性检测反义核酸的毒性；通过RT-PCR检测c-Raf-1基因mRNA水平的变化；通过HBV小鼠水动力模型验证反义核酸药物 Raf-3145体内是否具有抗HBV活性； 2. 通过HBV小鼠水动力模型体内评价 CT102是否对 HBV复制具有抑制作用,并检测 CT102是否对干扰素-α和干扰素-γ的表达具有诱导作用；3. 通过HBV小鼠水动力模型体内评价CpG-ODN 1826对HBV复制的抑制效果,并通过对小鼠血清中干扰素-α和干扰素-γ的检测验证CpG-ODN 1826对两者的强诱导作用。 结果：1. 经体外筛选,靶向c-Raf-1基因的反义核酸Raf-3145具有相对明显的抑制 HBsAg的作用,mRNA水平结果显示 Raf-3145可剂量依赖性的抑制c-Raf-1基因的表达；体内药效学结果显示反义核酸 Raf-3145在30 mg/kg剂量下对HBsAg的表达具有一定的抑制作用,并呈现显著性差异(p<0.001),并且在该剂量下未见明显的毒性； 2. 体内药效学结果显示CT102在腹腔注射隔天给药12次第28天检测时高剂量30 mg/kg可完全抑制表面抗原的表达,并呈现显著性差异(p<0.001),中剂量10 mg/kg和低剂量 3 mg/kg时呈现一定促进作用(p<0.01)；检测血清中干扰素分泌结果显示在30 mg/kg剂量下CT102对干扰素-α和干扰素-γ具有一定诱导作用； 3. 经体内验证,在腹腔注射隔天给药12 次第 28 天后发现,CpG-ODN 1826 对血清 HBsAg 和 e 抗原的表达、肝内HBV DNA的复制和肝内HBV核心抗原(HBcAg)的表达均具有明显的抑制作用并呈现一定的剂量依赖效应；血清中干扰素检测结果显示不同剂量的CpG-ODN 1826对干扰素-α和干扰素-γ均具有一定诱导作用。 结论：1. 经体内外活性评价初步确定了靶向宿主基因 c-Raf-1的反义核酸Raf-3145具有一定的抑制HBsAg表达的活性,也进一步验证了c-Raf-1基因可以作为抗HBV药物设计的候选靶点；2. CT102的抗HBV效果可能与其干扰素诱导作用相关；3. 小鼠强效免疫刺激剂CpG-ODN 1826可以有效抑制HBV的复制,尤其对 HBsAg 的清除作用明显,是当前干扰素和核苷类药物的有益补充,可能有利于打破HBV慢性感染的免疫耐受,为将来深入研究CpG-ODN抗HBV活性提供了前期借鉴。