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目的:宫颈癌是妇科常见肿瘤中之一,全球每年约有30万妇女死于此病,死亡率居世界首位。目前,在传统的三大疗法基础上,宫颈癌的辅助免疫治疗已成为近年来的研究热点。肿瘤细胞通过分泌免疫抑制物质抑制免疫功能从而逃避免疫监视,是肿瘤发生发展的重要机制之一。因此,研究下调肿瘤免疫抑制物质分泌,寻找能够逆转肿瘤免疫抑制的有效药物,是开发抗瘤药物、明确其抗瘤免疫机理和指导临床合理应用的重要方面。中药制剂青蒿琥酯ART具有一定的抗瘤作用,以往研究主要集中在上调机体免疫功能指标、诱导肿瘤细胞凋亡或分化、影响肿瘤组织血管生成以及对肿瘤细胞生长的抑制和细胞毒方面,而对其影响肿瘤细胞免疫抑制及相关物质的分泌,从免疫抑制角度揭示其抗肿瘤机理的系统研究,国内外尚少见报道。有研究发现,宫颈癌细胞培养上清具有免疫抑制作用,是其分泌免疫抑制物质所致,报道较多的是转化生长因子(TGF)β1、白介素(IL)10及前列腺素(PG)E2等,而对其分泌外来体(Exosomes)研究尚无报道。本实验通过检测ART对Hela细胞免疫抑制物质的影响,旨在揭示ART抗瘤新机制,为进一步开发具有我国特色和自主知识产权的抗癌中药制剂奠定实验基础和提供理论依据。方法:确定Hela细胞最佳接种浓度及培养时间后,MTT法筛选对Hela细胞无直接毒性的最高ART浓度。制备经ART作用48h后的培养上清(ART-S),洗涤去除ART,收集连续两次以新鲜培液进行48h再培养的Hela细胞上清(分别称为ART-S1、ART-S2),以不经ART作用的相应同步培养的Hela细胞培养上清作对照(分别称为Control-S、Control-S1、Control-S2 )。定量ELISA法测定各上清中TGF-β1、IL-10的含量,紫外分光光度法测定PGE2的A278值;梯度离心法提取上清中的Exosomes,扫描电镜下观察其大小形态,紫外分光BCA法检测蛋白定量的A280;统计分析ART下调Hela细胞免疫抑制靶分子分泌的种类和程度。结果:1.经MTT法确定实验用Hela细胞接种浓度为2×105/mL,培养时间为48h;2.经MTT法确定实验用对Hela细胞无直接毒性作用ART最高浓度为3.13mg/L;3.未经ART作用的Hela细胞可稳定分泌所测的4种免疫抑制物质,以TGF-β1含量最高,可达(989.226±34.836 )ng/mL,IL-10的含量为(3.391±0.164)pg/mL,PGE2的含量为(1.318±0.076)pg/mL,Exosomes的OD280值为(0.178±0.027)。经ART作用后的Hela细胞,ART-S与Control-S相比,TGF-β1、IL-10、PGE2的含量明显降低,分别为(2.859±0.520)ng/mL(P <0.001,仅为Control-S含量的0.29%)、(3.010±0.217)pg/mL(P<0.05,为Control-S含量的88.76%)、(1.147±0.931 )pg/mL(P <0.05,为Control-S的58.43%);Exosomes含量检测值无显著变化(0.143±0.029, P>0.05)。其第一次48h再培养上清(ART-S1)与ART-S相比,TGF-β1、PGE2、Exosomes显著降低,分别为(0.009±0.001)ng/ml(P <0.001,仅为Control-S1含量的0.00008%)、(1.129±0.916)pg/mL(P <0.05,为Control-S1的52.67%)、0.063±0.142(P<0.05,仅为Control-S的35.4%);IL-10的含量显著回升(3.121±0.137)pg/mL(P <0.05)。其第二次48h再培养上清(ART-S2)与ART-S1相比,TGF-β1含量显著回升(0.576±0.032)ng/mL(P <0.001),为Control-S2含量的0.06%; IL-10含量及PGE2含量无显著变化,分别为(3.207±0.082) pg/mL(P>0.05)、(1.205±0.931) pg/mL(P>0.05);Exosomes的含量与ART-S1相比明显回升(0.135±0.017, P<0.05),Exosomes蛋白定量显示第二次48h再培养上清(ART-S2)但与Control-S2相比降低为Control-S2的75.84%。扫描电镜观察ART作用前后Hela细胞分泌Exosomes的大小、形态无明显差别。结论:1. Hela细胞可稳定分泌所测4种免疫抑制物质。2.ART可下调Hela细胞分泌免疫抑制物质TGF-β1、IL-10、PGE2及Exosomes。3. TGF-β1可能是Hela细胞分泌的优势免疫抑制分子。4.下调肿瘤免疫抑制物质分泌可能是ART的抗瘤免疫作用新机制。