放线菌新抗生素生物合成基因的发掘

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木试验从采自北京、湖南、湖北、广州、吉林5个地区的31份土样中共分离放线菌303株,从抗菌活性、甲醇提取物紫外可见吸收光谱及次生代谢基因等方面进行了研究。以金黄色葡萄球菌(Staphlococcus aureus)、花生青枯病菌(Pseudomonas glumae)、胡萝卜软腐欧文氏病菌(Erwinia carotovora)、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)为指示菌,测定了分离的303株放线菌的抑菌活性。结果显示:共有39株放线菌表现出了抗细菌活性,其中有30株、19株和18株放线菌分别对花生青枯病菌(P. glumae)、欧文氏胡萝卜软腐病菌(E. carotovara)和金黄色葡萄球菌(S. aureus)表现出抑菌活性,14株放线菌对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有作用。共有53株放线菌显示抗真菌活性,其中48株对水稻纹枯病菌(R. solani)有抑菌活性,25株对油菜菌核病菌(S. sclerotiorum)有抑菌活性,有19株对水稻纹枯病菌(R. solani)和油菜菌核病菌(S. sclerotiorum)均有抑菌活性。测定了所分离放线菌甲醇提取物紫外-可见光谱,根据最大吸收峰和吸收曲线特性,将放线菌划分为19个类群。结合抑菌活性筛选和聚酮合酶(PKS)基因和非核糖体肽合成酶(NRPS)基因PCR检测结果,发现吸收峰与抑菌活性以及PKS和NRPS基因有一定的相关性。利用聚酮合酶(PKS)基因和非核糖体肽合成酶(NRPS)基因简并引物对生物合成基因簇检测。在分离到的303株放线菌中,有10个菌株扩增出约700bp的Ⅱ型PKS基因片段,有2个菌株扩增出700bp左右的NRPS基因片段,BLAST比对结果表明这些基因簇可能能够合成新化合物,预测蛋白序列显示,44和126菌株可能能够合成Angucycline类抗生素。根据16SrDNA基因BLAST比对结果及电镜扫描结果,鉴定46号菌株应为链霉菌属。本试验获得重组质粒pWXl,为下一步生物合成基因簇的克隆奠定了研究基础。
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