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慢性乙型肝炎是我国常见的一种慢性传染病,严重危害着国民的身体健康。机体的免疫功能在机体清除HBV过程中发挥着重要作用。目前Th17细胞与慢性乙型肝炎的关系还研究甚少,因此本研究以慢性HBV感染者为研究对象,以健康献血者为正常对照(HC),研究慢性HBV感染者不同疾病状态下,即无症状携带者(AsC)、慢性乙型肝炎轻中度(CHB-LM)、慢性重型乙型肝炎(CSHB),Th17细胞和Treg细胞为中心的免疫平衡状态。方法:1.外周血Th17细胞和Treg细胞与机体的免疫或临床状态的相关性研究:选取无症状HBV携带者(AsC)、慢性乙型肝炎轻中度患者(CHB-LM)、慢性重型乙型肝炎(CSHB)、健康献血员(HC)作为研究对象,经知情同意后于分别抽取外周肝素抗凝血静脉血,采用流式抗体进行细胞膜和胞内染色技术运用流式细胞仪检测外周血中Th17细胞、Treg细胞、Th1细胞的比例。分析各组之间细胞比例的差异是否有显著性,分析各样本Th17细胞、Treg细胞比例是否与免疫细胞Th1细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、DC细胞的比例是否具有相关性,及是否与HBV-DNA定量和肝功能(ALT、AST、TB、DB)具有相关性。2. Th17细胞、Treg细胞和Th1细胞的特异性转录调节因子RORc、Foxp3和T-bet与机体免疫或临床状态的相关性研究:采用Real-time PCR方法检测各组外周血细胞内转录因子RORc、Foxp3和T-bet的mRNA表达水平。分析各组之间基因表达的差异是否有显著性。分析各样本RORc、Foxp3和T-bet是否具有相关性,及是否与HBV-DNA定量和肝功能(ALT、AST、TB、DB)具有相关性。3.外周血血浆中相关细胞因子与机体免疫或临床状态的相关性研究:采用ELISA方法检测外周血血浆中IL-17、TGF-β、IFN-γ、IL-1β、IL-6及IL-21的浓度。分析各组之间各细胞因子浓度的差异是否有显著性。分析各样本各细胞因子是否具有相关性,及是否与HBV-DNA定量和肝功能(ALT、AST、TB、DB)具有相关性。结果:1.外周血Th17细胞和Treg细胞与机体的免疫或临床状态的相关性研究:CSHB患者外周血中Th17/CD4+T%在明显高于与HC组、AsC组和CHB-LM,但是在HC组、AsC组和CHB-LM组间差异统计学无意义。检测Treg/CD4+T%发现,AsC组Treg细胞频率明显升高,与CSHB组相比统计学意义(P<0.05),但与其他受试组无明显差异。比较各组外周血Th1/CD4+T%发现,CSHB组和CHB-LM组的Th1细胞比例下降,以CSHB组下降更为明显。CSHB组与HC组、CSHB组与AsC组相比较差异有统计学意义(P<0.05),而与CHB-LM组无显著性差异。慢性HBV感染可不影响外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例,但对NK/lym%和DCs/lym%有影响。在CSHB组外周血NK细胞比例明显下降,与HC组、AsC组和CHB-LM组相比,均有显著性差异(P<0.01),同时CHB-LM与HC组之间,CHB-LM与AsC组之间比较也有统计学差异(P<0.05)。外周血DC/lym%以CHB-LM组最高,较HC组(P<0.05)与CSHB组(P<0.01)均有统计学差异。比较外周血中各细胞之间的相关性:Th17细胞比例与Treg细胞比例呈负相关(P<0.05),Th1细胞与Treg细胞呈正相关(P<0.05)。Th17/CD4+T%与TB呈显著正相关(P<0.01),而Treg/CD4+T%与HBV-DNA定量呈正相关(P<0.01),两者均未与ALT、AST有显著相关性(P>0.05)。2.Th17细胞、Treg细胞和Th1细胞的特异性转录调节因子RORc、Foxp3和T-bet的表达水平比较:CSHB组与AsC组、CHB-LM组相比RORc的表达水平明显增高,有统计学差异(P<0.05),但与HC组相比无差异。Treg细胞和Th1细胞的特异性转录调节因子Foxp3和Tbet在各组间均无差异,但两者之间存在正相关性(r=0.408,P<0.05)。Foxp3与ALT呈负相关(r=-0.419,P<0.05)。3.外周血血浆中相关细胞因子与机体免疫或临床状态的相关性研究:外周血血浆中TGF-β的检测结果比较发现,其在各组间无明显差异。对IL-17检测结果比较显示,在AsC组与HC组,AsC组与CHB-LM组有显著性差异(P<0.05)。比较各组IFN-γ在血浆中的水平发现,CSHB组与HC组、AsC组存在差异(P<0.05)。IL-1β和IL-6在慢性HBV感染者外周血血浆中均明显高于健康对照者,其中HC组与CHB-LM组、CSHB组相比较均有统计学差异(P<0.05),而AsC组与其他各组相比较均无差异(P>0.05)。CSHB组与HC组、CSHB组与CHB-LM组血浆中IL-21比较均存在统计学差异(P<0.05)。IL-17与IL-21之间存在正相关,IL-1β与IL-6之间存在正相关性。相关系数分别为0.262和0.253。IFN-γ与肝功能各项指标(ALT、AST、TB、DB)均呈正相关,与HBV-DNA之间不存在相关性。IL-21与AST、TB、DB之间存在正相关,与HBV-DNA之间存在负相关。结论:慢性HBV感染者外周血Th17细胞处于功能活跃状态,在一定程度上与病情严重程度呈正相关,Treg细胞可导致慢性HBV感染后产生免疫耐受状态,与HBV-DNA定量呈负相关。外周血中Th17细胞与Treg细胞的比例负相关,另外考虑到两种细胞的产生机制,我们推断两者在机体内可能处于一种免疫平衡状态。Th17细胞分泌的IL-17与肝细胞的损伤无明显相关性,但IL-21与慢性HBV感染病情严重程度呈正相关,而IL-21主要由Th17细胞分泌,提示Th17细胞可能是通过IL-21产生相应的免疫效应。