紫花苜蓿乙烯应答转录因子基因MsERFL1的抗逆性研究

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紫花苜蓿(Medicago sativa L.)是一种优质多年生豆科牧草,具有蛋白含量高、营养价值丰富的特点,在畜牧业发展中占有举足轻重的地位。然而,随着植被退化面积和土壤盐碱化程度的加剧,苜蓿的种植推广受到了一定限制。因此,培育耐逆性较强的苜蓿新品种对于苜蓿产业的发展尤为重要。乙烯应答因子(ERFs)普遍存在于植物中,调节植物的生长发育,同时也参与植物的逆境胁迫应答。目前通过基因工程手段,利用ERFs转录因子改良植物抗逆性的研究比较多,但对于紫花苜蓿中ERFs转录因子的研究却比较少。因此,研究苜蓿中ERFs转录因子对于提高苜蓿抗逆性有重要的理论意义和经济价值。本试验根据前人研究成果获得了一个ERF亚家族基因Ms ERFL1及其c DNA序列,分析了Ms ERFL1基因不同处理条件下的表达特性和正常环境下的组织表达差异性。荧光定量PCR结果表明,Ms ERFL1基因存在于叶片、根、茎和顶芽四种不同组织中,是组成型表达基因。叶片中表达量显著高于其他组织,推测该基因可能与叶的生长发育相关。茎中表达量最低,推测Ms ERFL1基因与茎的相关性较小或者表达被抑制。诱导处理结果表明,Ms ERFL1基因可被Na Cl、PEG6000、ABA诱导上调表达,其中Na Cl胁迫应答最剧烈,PEG6000胁迫应答最迅速。寒冷和GA3处理抑制了Ms ERFL1基因的表达,而IAA激素诱导后Ms ERFL1基因表达水平无明显变化。因此,Ms ERFL1基因可能参与依赖ABA途径的逆境胁迫应答。本试验构建了Ms ERFL1基因过表达载体,利用农杆菌介导法转化紫花苜蓿,并分析了转基因苜蓿的耐盐性。结果表明,250mmol/L Na Cl胁迫处理后,转Ms ERFL1基因苜蓿和野生型苜蓿MDA和脯氨酸含量都显著升高,但转基因苜蓿MDA含量明显低于野生型植株(P<0.05),而脯氨酸含量显著高于野生型苜蓿(P<0.05)。初步判断Ms ERFL1基因提高了苜蓿耐盐性。
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