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抗菌肽(Antimicrobial peptides)是机体产生的一类能够抑制微生物甚至癌细胞,并且对自身起到保护防御的小分子阳离子多肽。抗菌肽对污染食品的G+和G-有较强的抑制作用,溶解性和稳定性好,抗菌谱广,极有潜力发展成为一种新型的天然食品防腐剂。本论文采用基因工程法表达三种抗菌肽,旨在为生产高活性、高产量的抗菌肽提供一种途径。CFBD-1、UyCT5和Hispidalin分别来源于蝾螈皮肤分泌物、蝎子和冬瓜种子中,分子量分别为4.5KDa、1.4KDa和5.7KDa。人工合成抗菌肽CFBD-1和UyCT5基因,将其分别克隆到大肠杆菌载体pMAL-c2X和pGEX-2T中,构建重组表达质粒。再将重组质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导融合蛋白表达。结果表明,在IPTG浓度为0.2 mmol/L,温度为28℃,诱导时间为6 h条件下,融合蛋白MBP-CFBD-1不完全表达,GST-UyCT5成功表达。体外抑菌实验结果表明,GST-UyCT5对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌151-1、单增李斯特菌和沙门氏菌均无抑菌活性。随后将抗菌肽基因Hispidalin和CFBD-1克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建重组表达质粒。对重组质粒Sacl酶线性化后,电转入毕赤酵母GS115感受态细胞中,甲醇诱导融合蛋白表达。结果表明,在甲醇浓度为1%,250 mL摇瓶装液量为25 mL,温度为28℃,诱导时间为144 h条件下,His-Hispidalin融合蛋白表达量为120.21 μg/mL。His-CFBD-1未表达。体外抑菌实验结果表明,His-Hispidalin融合蛋白对枯草芽孢杆菌151-1,L300-1,LZZ-133和单增李斯特菌有明显的抑制作用。最小抑制浓度分别为75,67,83,75 μg/mL。最后,对诱导条件进行优化,在甲醇浓度为0.5%,250 mL摇瓶装液量为50 mL,温度为28℃,诱导时间为120 h条件下,His-Hispidalin融合蛋白最高表达量为133.87 pg/mL,较优化前融合蛋白表达量提高了 11.4%。