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目的:通过观察妇科腹腔镜手术患者术后血清中血栓蛋白的变化,并将腹腔镜手术患者血清作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV304),观察细胞形态变化及合成血栓蛋白的情况,探讨腹腔镜手术的特殊因素是否会增加血管内皮细胞的损伤,从而增加术后深静脉血栓的发生。
方法:
1.预实验:用酶联免疫双抗体夹心法(ELISA法)测定试验前期8名患者的灭活/未灭活血清、灭活/未灭活血浆中血栓蛋白的含量,确定未灭活血清为实验标本来源。
2.临床研究:(1)选取腹腔镜下全子宫切除术19例为研究组,同期经腹全子宫切除手术19例为对照组。(2)于术前及手术结束时各抽静脉血分别测血小板数量(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)及血栓蛋白(TM),观察在二氧化碳气腹下腹腔镜手术及经腹手术对上述指标的影响。
3.实验研究:(1)将研究组及对照组各8例,取术前后血清作为介质分别作用于体外培养的ECV304,观察其对细胞形态的影响。(2)ELISA法测定血清作用后ECV304细胞液中血栓蛋白(TM)的含量变化,并同时设空白对照。研究结果计量资料采用t检验、u检验、单因素方差分析,样本均数方差分析(F检验),计数资料采用X2检验,并采用SPSS软件包进行统计学分析。
结果:
1.同一患者未灭活血清/灭活血清、未灭活血浆/灭活血浆中血栓蛋白含量的差异无统计学意义。
2.(1)研究组及对照组的自身术前术后的比较显示,两组术后PLT均有不同程度下降,但无统计学意义,PDW,MPV,TM术后变化较小,差异无统计学意义。(2)比较研究组与对照组PLT、PDW、MPV、TM的术前后差值,组间差异无统计学意义。
3.(1)不加血清的空白对照组ECV304细胞培养2、4、12、24小时后,其细胞培养液中TM的浓度变化无统计学意义。(2)研究组及对照组术前后血清加入细胞培养液后培养2、4、12、24小时,其上清液中的TM浓度较干预前血清中基础TM浓度明显升高,变化有统计学意义,干预的不同时间各组间比较差异无统计学意义。(3)研究组术前后血清作用于内皮细胞2、4、12、24小时后,相同作用时间的两组细胞培养上清液中TM含量比较,差异无统计学意义。(4)对照组术前后血清作用于内皮细胞2、4、12、24小时后,相同作用时间的两组细胞培养上清液中TM含量比较,差异无统计学意义。(5)ECV304细胞传代后呈梭形或多角形,铺路石状镶嵌排列,细胞边界清楚,胞浆丰富,胞核椭圆居中,核仁明显,具有血管内皮细胞的形态学特点。经血清作用24小时后,倒置相差显微镜下观察研究组及对照组细胞形态变化,均有细胞变圆、退缩脱落现象。
结论:
1.未灭活血清可代表灭活血清,灭活血浆作为本试验的标本来源,简化实验流程。
2.与经腹全子宫切除术相比,腹腔镜全子宫切除术不增加受术者血小板参数的变化,也不促进血栓蛋白的产生。
3.腹腔镜及经腹全子宫切除术均不增加受术者血清对体外培养的内皮细胞合成血栓蛋白含量的影响。