猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）目前无法治愈,病死率较高,已给生猪产业造成严重的经济损失。疫苗免疫是防控本病有效手段,但2011年以来,许多免疫猪群再次受到伪狂犬病毒（pseudorabies virus,PRV）严重感染的威胁,爆发原因尚存争议。因此,本研究欲通过分离流行毒株并分析其抗原性和免疫原性,以期解析猪伪狂犬病毒再次流行的原因,为猪伪狂犬病的防控提供数据支撑和理论基础。本研究对PRV gE基因PCR阳性猪脑组织病料上清液,经Vero细胞培养分离到一株病毒株。电镜观察病毒颗粒形态鉴定为直径约150 nm,有囊膜,囊膜外有明显的呈放射状的纤突。经间接免疫荧光检测发现病毒感染细胞出现特异性荧光,确定该病毒是PRV。基因序列对比分析,发现该毒株虽与近几年分离到的PRV毒株处于同一分支,但与传统毒株和国外毒株相距较远,表明该毒株已发生变异,故将其命名为PRV GD1406株。通过对广东地区猪伪狂犬病血清学调查,收集免疫过Bartha-K61疫苗的猪血清,用ELISA法筛选出gB抗体为阳性且gE抗体阴性的猪血清,并以Bartha-K61与PRV GD1406为抗原进行血清中和抗体试验。结果显示,Bartha-K61疫苗血清与Bartha-K61株和PRV GD1406株的平均中和抗体滴度分别为1:57和1:13,表明该血清对Bartha-K61的中和能力较高,而对PRV GD1406的中和能力较低,PRV GD1406抗原性可能发生变异,表明Bartha-K61疫苗可能不能有效抵抗PRV新变异株的攻击。以致死量100 LD₅₀的Bartha-K61和PRV GD1406毒株于颈背部接种BALB/c小鼠进行攻毒,进行交叉免疫保护试验。结果显示,面对PRV GD1406株的致死性攻击,Bartha-K61疫苗保护率为20%,而PRV GD1406株灭活疫苗保护率提高为40%,表明PRV GD1406免疫小鼠比Bartha-K61免疫小鼠的保护率可提高2倍,有望成为研发新疫苗的备选毒株。本研究从再次流行PR的猪场分离出一株PRV GD1406,经交叉中和试验对其抗原性检测发现该新流行株发生了抗原变异,是Bartha-K61疫苗免疫后再次流行的原因之一。通过小鼠免疫保护模型PRV GD1406株灭活疫苗保护率翻倍,且该疫苗经灭活后不能在机体内增殖等因素导致免疫效果较减毒活疫苗差,进一步提示PRV GD1406株成为研发疫苗备选毒株的潜力。本研究解析了市场现用疫苗不能为PRV变异株感染猪群提供有效保护的原因,为猪伪狂犬病防控提供了参考依据,也为研制有效控制新流行猪伪狂犬病疫苗提供数据支撑和新思路。