目的：应用体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞，观察<99>Tc-MDP(锝99标记的亚甲基二瞵酸盐)及帕米膦酸二钠对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响及其作用差异，为<99>Tc-MlDP治疗乳腺癌骨转移提供新的依据。 方法： 1.细胞培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231复苏后，采用RPMI-1640培养基加入10％小牛血清和体积分数为青、链霉素各2×10<5> U·L<-1>，按常规细胞培养方法置37℃、5％CO<,2>，饱和湿度的恒温孵箱中培养，细胞贴壁生长。待细胞长满瓶底约80％时，0.25％胰酶消化、传代。 2.实验分组将处于对数生长期的乳腺癌MDA-MB-231细胞株按相应的浓度加入培养瓶或96孔培养板于37℃、5％CO2含量，饱和湿度的孵育箱中培养24h后，设<99>Tc-MDP组、帕米膦酸二钠组和空白对照组。每组加入不同浓度(50、100、200μM)的<99>Tc-MDP、帕米膦酸二钠和空白对照组(培养基+质量分数0.9％NaCl)。 3.细胞生长曲线测定以5×10<3>个/孔MDA-MB-231单细胞悬液接种于96孔培养板中，按实验分组加入试剂，每组设3个复孔，每隔24h取3孔，连续取5d，消化计数，绘制生长曲线。 4.形态学观察倒置相差显微镜观察形态学上的变化。 5.细胞增殖抑制试验采用MTT法检测<99>Tc-MDP和帕米膦酸二钠对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制情况，测定其吸光度(OD)值，计算细胞增殖抑制率=(1-A实验组/A对照组)×100％。 6.流式细胞术分析采用美国B.D公司：FACS-420流式细胞仪检测<99>Tc-MDP和帕米膦酸二钠作用细胞48h后细胞凋亡、细胞周期及凋亡相关基因bcl-2与bax蛋白的表达。 结果： 1.利用细胞计数绘制细胞生长曲线，示经<99>TC-MDP及帕米膦酸二钠处理后MDA-MB-231存活细胞数量明显减少，经<99>Tc-MDP处理的MDA-MB-231存活细胞数量与帕米膦酸二钠处理的MDA-MB-231存活细胞数量相比前者减少更明显。 2.采用MTT法测定细胞增殖抑制率，示经<99>Tc-MDP及帕米膦酸二钠处理后MDA-M=B-231细胞生长缓慢，出现明显的生长抑制，并呈浓度和时间依赖性。经<99>Tc-MDP处理后MDA-MB-231细胞生长抑制作用较帕米膦酸二钠处理后MDA-MB-231细胞更明显。 3.形态学观察倒置相差显微镜观察，空白组细胞生长良好，细胞透明，密度较大，细胞呈梭形，胞浆内颗粒较少，细胞核隐约可见。<99>Tc-MDP组及帕米膦酸二钠组细胞密度明显减少，细胞颗粒较多，细胞间界限模糊，漂浮细胞数量增加，存活细胞显著减少。 4.细胞凋亡率变化，流式细胞仪检测示50μM剂量组<99>Tc-MDP及帕米膦酸二钠处理细胞后，凋亡率分别为9.59％和5.96％，而空白组细胞凋亡率为1.78％。随<99>Tc-MDP及帕米膦酸二钠浓度的增加，凋亡率增加，200μM剂量组<99>Tc-MDP及帕米膦酸二钠处理细胞后，凋亡率分别达到17.84％和17.13％，空白组细胞凋亡率变化不明显。<99>Tc-MDP组及帕米膦酸二钠组与空白组相比较，差异有显著性(P<0.05)，显示<99>Tc-MDP及帕米膦酸二钠均能诱导乳腺癌细胞凋亡。 5.细胞周期变化，细胞周期分析表明50μM<99>Tc-MDP组细胞处于G<,0>/G<,1>期和S期细胞分布百分率分别为51.0％和39.5％，50μM帕米膦酸二钠组细胞处于G<,0>/G<,1>期和S期细胞分布百分率分别为43.80％和50.70％，空白组分别为53.07％和34.80％，<99>Tc-MDP组及帕米膦酸二钠组与空白组相比较(P<0.05)。100μM<99>Tc-MDP组细胞处于G<,0>/G<,1>期和S期细胞分布百分率分别为36.70％和53.40％，100μM帕米膦酸二钠组细胞处于G<,0>/G<,1>期和S期细胞分布百分率分别为34.0％和61.3％，<99>Tc-MDP组及帕米膦酸二钠组与空白组相比较(P<0.05)，<99>Tc-MDP组与帕米膦酸二钠组相比较(P<0.05)，分布百分率差异有显著性。200μM<99>Tc-MDP组细胞G<,0>/G<,1>期和S期细胞分布百分率分别为36.6％和52.50％，200μM帕米膦酸二钠组细胞处于G<,0>/G<,1>期和S期细胞分布百分率分别为37.40％和49.9％，<99>Tc-M=DP组及帕米膦酸二钠组与空白组相比较(P<0.05)，分布百分率差异有显著性，<99>Tc-MDP组与帕米膦酸二钠组相比较(P>0.05)，无统计学意义。G<,2>/M期细胞分布百分率则相反，即<99>Tc-MDP组与帕米膦酸二钠组细胞在此期内细胞分布百分率减少，空白组细胞分布百分率增多。 6. Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达量流式细胞仪间接免疫荧光法检测Bcl-2蛋白和Bax蛋白基因表达相对含量，<99>Tc-MDP组各浓度处理MDA-MB-231细胞2d后均使Bcl-2蛋白表达相对含量FI≤1.0(阴性表达)。200μM帕米膦酸二钠处理MDA-MB-231细胞2d后使Bcl-2蛋白表达相对含量FI≤1.0(阴性表达)，50μM和100μM帕米膦酸二钠处理MDA-MB-231细胞2d后使Bcl-2蛋白表达相对含量分别为1.27和1.18，随作用剂量增加，Bcl-2蛋白表达相对含量逐渐降低。<99>Tc-MDP组及帕米膦酸二钠组与空白组相比对Bax蛋白表达的相对含量调节无显著差异(P>0.05)。 结论：在体外，<99>Tc-MDP和帕米膦酸二钠均能抑制MDA-MB-231细胞增殖及诱导MDA-MB-231细胞凋亡，并调控Bcl-2蛋白的表达；<99>Tc-MDP作用强于帕米膦酸二钠。