大豆慢生型根瘤菌Bradyrhizobium diazoefficiens的bjaI-bjaR1群体感应系统突变对细菌氮代谢过程的影响

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细菌群体感应(quorum sensing,QS)是指细菌的基因表达依赖于细菌种群密度的调控。QS系统是一种普遍的细菌信息交流方式,作为基因表达调控网络的重要组成部分,使得细菌感知群体密度,协调群体行为,适应不断变化的环境或者参与寄主的互作过程。慢生型根瘤菌Bradyrhizobium diazoefficiens主要与大豆共生,具有优良的结瘤固氮效率,B.d iazoefficiens USDA110(B.d 110)是该种的模式细菌。B.d 110染色体上Bja I-Bja R1与革兰氏阴性细菌经典型Lux I-Lux R QS系统同源。前期RNA-seq研究发现,Lux R型Bja R1转录因子突变导致细菌氮代谢过程大量基因表达显著下降,本研究通过构建报告基因转录融合体,继续探究bja R1突变对根瘤菌氮代谢过程的影响。研究成果有助于提升对大豆-慢生型根瘤菌共生固氮体系理论认知,研发高效固氮菌株,提高结瘤固氮效率,减轻环境土壤污染,助力绿色农业发展。研究结果如下:1、以野生体菌株B.d 110与突变体菌株B.dΔbja R1为背景,构建了群体感应系统高丝氨酸类脂信号物合成酶基因bja I与固氮还原酶基因ni H启动子与报告基因gus A的转录融合体菌株;氮同化代谢过程关键基因gln II(编码谷氨酰胺合成酶)、gln B(编码氮代谢调节因子)以及amt B(编码氨转运蛋白)启动子与报告基因lac Z的转录融合菌株。2、研究显示,bja R1的缺失导致根瘤菌在大豆根瘤中的固氮酶活性(ARA,乙炔还原活性)和nif H基因启动子活性显著提高。表明,bja R1的敲除可以显著提高大豆慢生型根瘤菌固氮能力;gln II-lac Z、gln B-lac Z与amt B-lac Z在接种大豆20天的根瘤中活性最高,而nif H-gus A在30天最高,表明类菌体中氮同化代谢相关基因的表达在固氮过程开启前,就逐渐下降。此外,无论在自由生活还是接种条件下,突变菌株B.dΔbja R1中,这些氮同化代谢基因转录融合体的活性均显著低于野生体菌株。因此,氮同化代谢过程在B.dΔbja R1突变株体内受到更加严重的抑制,可能是导致其固氮能力显著提高的原因之一。3、自由生活状态下,与野生体菌株B.d 110相比,外源无机氮化合物(NH4Cl、Na NO3以及Na NO2)的添加显著促进突变体菌株B.dΔbja R1生长,表明bja R1参与细菌对环境氮营养水平的响应;NO3--氮除外,20 m M NH4+-氮以及NO2--氮高氮营养条件下的大豆接种实验显示,接种突变菌株B.dΔbja R1的大豆根的投影面积、表面积、根总长度、根系总体积和固氮酶活性均比野生株显著增加,表明bja R1基因突变能缓解高浓度的无机氮化合物对大豆共生固氮的抑制作用,极可能是氮同化代谢不敏感菌。综上,大豆慢生型根瘤菌中的群体感应系统可能参与调控根瘤菌的氮营养代谢过程,从而影响根瘤菌的固氮作用。
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