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[背景]胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,我国是胃癌的高发区。近年来,胃癌的发病率虽有所下降,但其死亡率仍居高不下。出现腹膜转移标志着病程已进入晚期,晚期胃癌患者约60%是由于发生腹膜转移所致的顽固性癌性腹水、恶液质等而死亡。并且在胃癌术后复发中腹膜转移占50%左右,成为死亡的主要原因之一。胃癌的腹膜转移,被认为是一个多分子参与的复杂过程:首先,胃癌组织侵犯胃壁浆膜层,进入腹腔,进而脱落的癌细胞将种植于腹膜组织,形成腹膜转移,这就是被广泛认可的“种子—土壤”学说。当胃癌发生腹膜转移后,临床治疗效果十分不理想,因此,在参与腹膜转移的诸多分子中,找到一个靶向分子,进一步行靶向治疗将是至关重要的。前期工作中,我们成功建立了胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P,并通过噬菌体随机肽库技术,筛选出了与胃癌腹膜高转移细胞GC9811-P表面受体特异性结合的多肽PⅢ,进一步通过筛选差异性表达的基因,结合亲和层析技术,成功获得了多肽PⅢ的受体分子——血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1),而且初步推测为胃癌腹膜转移特异性的靶分子。HO-1是一种催化血红素氧化生成Fe++、CO、胆绿素的限速酶,胆绿素在胆绿素还原酶作用下,进一步还原成胆红素。血红素加氧酶有三种形式,HO-1是一种诱导型酶,其刺激因子包括血红素、氧化应激及其他各种因素;HO-2是其组成型表达形式;HO-3是近年来才被发现的第三种形式,研究证实它与HO-2有相似作用。自1986年首次发现以来,大量研究证实HO-1参与各种炎症反应及氧化应激过程,比如它有抗炎、抗凋亡及细胞保护作用。近年来,研究表明HO-1在各种恶性肿瘤中表达增高,并且参与肿瘤的抗凋亡过程,它也是肿瘤血管生成和转移的一种调节因子。本课题将对HO-1在胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P中的表达情况作一检测,同时,将构建HO-1小干扰RNA的真核表达载体,进一步探讨其对GC9811-P细胞系的体外侵袭转移作用的影响。[目的]1、明确HO-1是否在胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P中高表达;2、探讨下调GC9811-P中HO-1的表达是否会影响其体外侵袭转移的能力。[方法]1、利用Western-blot和RT-PCR的方法在蛋白和mRNA水平检测HO-1在GC9811-P中的表达情况;2、利用基因重组的方法构建含有HO-1特异性小干扰RNA的真核表达载体;3、经脂质体lipofectamine 2000介导转染GC9811-P细胞系,通过Western-blot及RT-PCR检测HO-1在蛋白及mRNA水平的表达变化;4、通过细胞划痕实验,Transwell小室实验观察GC9811-P细胞体外侵袭转移能力。[结果]1、HO-1在胃癌腹膜高转移细胞GC9811-P及其亲本细胞GC9811中的表达情况Western-blot检测结果显示:HO-1在GC9811-P中的表达较GC9811明显增高;RT-PCR检测结果显示:HO-1 mRNA在GC9811-P中的表达较GC9811明显增高。2、成功构建了HO-1-siRNA真核表达载体pEGFP-C1/HO-1-siRNA。3、获得成功转染了HO-1-siRNA的GC9811-P细胞,mRNA及蛋白水平显示HO-1在GC9811-P细胞中明显下降,而转染了空载体的细胞中HO-1表达无明显变化。4、细胞划痕实验结果显示转染了HO-1-siRNA组GC9811-P细胞的迁移不明显,而转染了空载体的细胞和未转染的空白对照组细胞大量迁移至划痕区。Transwell小室实验结果显示转染了HO-1-siRNA组GC9811-P细胞的穿膜数为(54.2±2.68),而转染了空载体组细胞的穿膜数为(83.2±5.71),未转染的空白对照组细胞穿膜数为(84.3±4.29),LSD-t检验分析各组间差异,HO-1-siRNA组细胞穿膜数小于阴性对照组及空白对照组(P<0.05),而阴性对照组与空白对照组间细胞穿膜数无明显统计学差异(P﹥0.05)。[结论]从本研究中,我们可以得出结论,HO-1在胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P中的表达较高,利用HO-1-siRNA下调其表达后,GC9811-P细胞系体外侵袭转移能力受到抑制,这就说明HO-1在GC9811-P细胞体外侵袭转移中发挥着重要的调节作用。