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猪瘟是一种传染性极强的急性、热性、高致死性传染病,发病率和死亡率很高,是威胁养猪业最重要的传染病,建立新的抗病毒方法,加快抗猪瘟动物育种研究,控制猪瘟的流行具有重要的现实意义。RNA干扰是广泛存在于生物体内,由双链RNA引发的转录后基因沉默机制,随着RNAi机制的逐步阐明及其应用技术的不断发展,现已成为最有潜力和应用价值的抗病毒感染方法之一。为了获得抗猪瘟病毒的新品种,本研究通过将RNAi技术和转基因猪制备技术相结合,培育出了稳定表达针对猪瘟病毒的shRNA的转基因克隆猪。首先根据RNAi的技术原理,基于载体PGKneotpAlox2,设计并构建了针对猪瘟病毒Npro基因的shRNA表达载体PGKneotlaAlox2-shRNA-N1N2和阴性干扰shRNA表达载体PGKneotpAlox2-shRNA-N1N2-Ctrl,转染原代猪胚胎成纤维细胞,经G-418筛选,获得猪瘟病毒特异性siRNA稳定表达细胞株28株,阴性对照siRNA克隆稳定表达细胞株30株,感染猪瘟病毒72h的间接免疫荧光和病毒滴度测定结果显示,所得克隆中PEF-N1N2-6,PEF-N1N2-11,PEF-N1N2-15,PEF-N1N2-21,PEF-N1N2-25对猪瘟病毒复制的抑制率超过90%。分别以获得的上述抑制率超过90%的细胞株为核供体细胞,通过细胞核移植技术制备转基因克隆猪,共获得到15头克隆猪,分离培养转基因仔猪细胞和同品种仔猪细胞,扩大培养后感染猪瘟病毒Shimen株,间接免疫荧光实验和病毒滴度测定实验表明,与同日出生的同品种非转基因仔猪相比,所构建的转基因克隆猪细胞上猪瘟病毒的增殖受到明显抑制。上述研究成果为研制抗猪瘟病毒的转基因克隆猪奠定了基础,并为建立抗其它病毒的转基因动物育种提供了参考数据。