论文部分内容阅读
油菜素内酯(BRs)是一种新型的类甾醇激素,除了在植物生长发育方面起重要的作用外,在植物对生物和非生物逆境的抗逆反应调控中扮演着重要的角色。研究蔬菜等农作物韧皮液中的基因、蛋白等物质对BRs的响应不仅对于揭示植物地上部和地下部间通过信号通讯协同植物生长、发育、抗逆等反应的机制具有重要的理论意义,而且对于蔬菜作物生长发育及抗性调控途径的探索也具有一定的现实意义。本文以主要设施蔬菜黄瓜为研究对象,从韧皮液mRNA和蛋白质物质的运输着手,通过结合利用消减杂交技术(SSH)和RT-PCR(Real-Time PCR)技术,从黄瓜韧皮液中克隆获得了一系列黄瓜代谢途径中对表油菜素内酯(EBR)响应的关键基因;研究还从蛋白质组学方面,利用2D-PAGE技术进一步研究了响应EBR的黄瓜韧皮蛋白,并就EBR对黄瓜生长发育及抗性的影响机制进行了探讨。所取得的主要结果如下:1)在EBR对黄瓜韧皮液RNA转录本影响的研究过程中,构建了黄瓜韧皮液受EBR处理之后的消减抑制杂交(SSH)文库,共获得650个克隆,随机260个克隆进行测序分析,得到28个独立基因,根据BLASTX分析推测这些基因编码的蛋白功能,可以分为能量与光合作用,运输通道,蛋白合成,细胞骨架,细胞分裂和分化,激素响应及逆境调控和其它相关的7大类,其中参与胁迫响应的基因占较大比例,表明EBR诱导了抗性相关基因,生长素和茉莉酸响应基因在SSH文库中出现,表明EBR可能与其它植物生长物质互作。2)EBR处理黄瓜叶片6h后,编码C60、C453、C568、C681、C579、C594、C564、C623、C637、C420等基因的表达均上调,说明EBR促进了这些基因的表达。3)韧皮蛋白双向凝胶电泳结果表明EBR处理叶片6h后,韧皮液中蛋白组成发生了明显的改变,28KDa蛋白点表达明显高于对照,另外三个蛋白点(60KDa、75 KDa、95 KDa)则明显弱于对照,说明EBR可能影响了相关基因的表达,促进或抑制了蛋白的合成并通过韧皮部运输到其他器官。综合以上结果我们认为,表油菜素内酯促进了黄瓜韧皮液中特定mRNA和蛋白表达的变化,mRNA和蛋白通过韧皮液运输到其它生长器官,调控植物的生长发育及抗性。