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动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是严重危害人类健康的常见病,常累及心脑血管等重要部位,有极高发病率和死亡率。因此防治动脉粥样硬化,改善患者的生活质量,减少心脑血管事件的发生率和病死率,成为亟待解决的医学难题之一本课题从文献研究、临床研究和实验研究三方面,通过对临床颈动脉粥样硬化患者观察及人脐静脉内皮细胞培养,对AS的发病机制进行分析,并对补肾活血化痰方抗AS的作用及炎症方面的作用机制进行探讨。一、文献研究中国古代医籍中没有动脉粥样硬化的病名,多将其归属于“胸痹”、“真心痛”、“中风”、“眩晕”、“头痛”、“痴呆”、“痰饮”、“瘀证”等病症。若机体脏腑功能失调,脾胃运化功能减弱,肾气渐衰,加之饮食肥甘厚味,气机失畅,易化生为痰浊,痰浊流滞于血脉日久则成痰瘀交结之证,正虚邪实相互影响,致使病变不断发展,多位学者多认为“痰浊”、“瘀血”为本病发病之关键。罗陆一教授认为,肾为人体之根本,主一身气血运行,肾虚气化无力则津聚成痰,温煦运化不足,血脉失于温运,血运无力,留而为瘀,故认为动脉粥样硬化属本虚标实之证,本虚则之于肾虚,标实在于痰瘀互结。动脉粥样硬化是一个慢性炎症过程,细胞黏附分子在动脉粥样硬化的形成和进展中起关键作用。在动脉粥样硬化形成过程中,首先是血管内皮在各种致炎刺激因子下损伤,细胞间黏附分子-1(Intercellular adhesion molecule, ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule, VC AM-1)等表达增加,调节白细胞的粘附,单核细胞穿越内皮摄取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),变为激活的巨噬细胞,吞噬ox-LDL成为泡沫细胞,引起巨噬细胞的清除反应和血管平滑肌细胞的增殖,从而形成动脉粥样斑块。白细胞与血管内皮细胞黏附是炎症反应的起始步骤,介导白细胞与内皮细胞相互作用的分子基础就是细胞黏附分子。二、临床研究目的:观察补肾活血化痰方对颈动脉粥样硬化患者症状积分,颈动脉内膜中层厚度、斑块Crouse积分、血脂、血清可溶性细胞黏附分子水平的影响,探讨补肾活血化痰方抗AS的作用及其作用机制。方法:选择颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis, CAS)患者100例,随机分为2组,补肾活血化痰方(Bushenhuoxuehuatan Formula, BF)组50例和阿托伐他汀(Atorvastatin Calcium, AC)组50例,分别用补肾活血化痰方和阿托伐他汀钙进行治疗6个月,对两组CAS患者治疗前后的症状、颈动脉IMT、斑块Crouse积分、血脂水平、血清sIC AM-1和sVCAM-1进行检测。结果:(1)治疗后BF组与AC组均可以明显降低症状积分(P<0.01,P<0.05),两组相比差异有显著性(P<0.05),BF组在改善症状方面优于AC组;(2)治疗后BF组与AC组均能明显降低双侧颈动脉内膜中层厚度(P<0.01,P<0.01),两组差异无显著性;(3)治疗后BF组与AC组均能显著降低颈动脉粥样硬化斑块Crouse积分(P<0.01,P<0.05);(4)治疗后BF组与AC组均可以明显降低CAS血清中的TC(P<0.05,P<0.01)、TG(P<0.05,P<0.05)水平,BF组可以明显降低LDL-C(P<0.05),升高HDL-C(P<0.01),BF组与AC组相比在升高HDL-C方面差异有显著性(P<0.05);(5)治疗后BF组与AC组可以明显降低CAS血清中sICAM-1 (P<0.01, P<0.01)、sVCAM-1 (P<0.01, P<0.01)水平。结论:补肾活血化痰方可以改善颈动脉粥样硬化患者症状,使症状积分明显降低,降低颈动脉内膜中层厚度,降低斑块Crouse积分,明显降低CAS患者血清中的TC、TG、LDL-C水平,升高HDL-C,明显降低CAS患者血清中sIC AM-1、sVCAM-1,补肾活血化痰方可能通过调节血脂水平、减少血清可溶性细胞黏附分子水平来发挥抗AS的作用。三、实验研究目的:观察补肾活血化痰方对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)存活率、ICAM-1、VCAM-1、NF-κB表达的影响。方法:通过SD大鼠制备补肾活血化痰方血清,0.25%胰蛋白酶分离原代HUVEC,传代后将HUVEC分为五组:①对照组:HUVEC+DMEM培养基+10%对照组血清;②TNF-α组:HUVEC+DMEM培养基+10%对照组血清+10ng/mL TNF-a;③补肾活血化痰方高剂量组:HUVEC+DMEM培养基+10%补肾活血化痰方高剂量组血清+10ng/mL TNF-a;④补肾活血化痰方中剂量组:HUVEC+DMEM培养基+10%补肾活血化痰方中剂量组血清+10ng/mL TNF-a;⑤补肾活血化痰方低剂量组:HUVEC+DMEM培养基+10%补肾活血化痰方低剂量组血清+10ng/mL TNF-a。采用CCK-8法检测HUVEC的存活率,ELISA法检测细胞ICAM-1和VCAM-1的表达,免疫细胞化学方法观察细胞NF-κB表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞ICAM-1 mRNA和VCAM-1 mRNA表达。结果:(1)补肾活血化痰方高、中、低剂量组细胞存活率分别为87.2%、82%、80%,TNF-α组细胞存活率为74.2%,各组细胞存活率与对照相比均降低,TNF-a组的细胞存活率最低;(2)与对照组相比TNF-α组细胞ICAM-1和VCAM-1的表达明显增高(P<0.01,P<0.01),补肾活血化痰方不同剂量组均能抑制TNF-α诱导的内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的表达,其中BF高剂量组与TNF-α组相比ICAM-1和VCAM-1的表达明显减少(P<0.01,P<0.01),BF中剂量组与TNF-a组相比ICAM-1的表达明显减少(P<0.05);(3)TNF-α组可见细胞胞浆中有大量棕黄色颗粒,部分胞核深染,NF-κB表达阳性,补肾活血化痰方各剂量组NF-κB阳性表达信号均弱于TNF-a组,尤其以高、中剂量组明显;(4)与对照组相比TNF-a组中内皮细胞ICAM-1mRNA、VCAM-1 mRNA表达明显增高(P<0.01,P<0.01),补肾活血化痰方高、中剂量组均能下调TNF-α诱导的内皮细胞ICAM-1 mRNA表达(P<0.01,P<0.01),补肾活血化痰方高剂量组能下调TNF-a诱导的内皮细胞VCAM-1 mRNA表达(P<0.05)。结论:补肾活血化痰方对TNF-a诱导人脐静脉内皮细胞的炎症反应有抑制作用,能抑制TNF-a诱导的内皮细胞ICAM-1、VCAM-1及NF-κB的表达,以高剂量组明显。这可能是补肾活血化痰方抗AS的作用机制之一。