【摘 要】
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近年来,羊乳及羊乳产品在消费者中的接受度被大幅提升,其营养安全品质倍受关注,羊乳及其产品的真实性甄别和营养品质安全监控的问题亟待解决。本研究围绕羊乳产品开展研究,通过聚合酶链式反应（PCR）技术和实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q PCR）技术探究、分析牛乳清粉的检测灵敏度和检测限,验证检测方法的稳定性和准确性,在此条件下设计了2种羊乳产品定性定量检测试剂
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近年来,羊乳及羊乳产品在消费者中的接受度被大幅提升,其营养安全品质倍受关注,羊乳及其产品的真实性甄别和营养品质安全监控的问题亟待解决。本研究围绕羊乳产品开展研究,通过聚合酶链式反应（PCR）技术和实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q PCR）技术探究、分析牛乳清粉的检测灵敏度和检测限,验证检测方法的稳定性和准确性,在此条件下设计了2种羊乳产品定性定量检测试剂盒,然后对市售羊奶粉中掺假牛乳成分进行定性和定量检测研究,最后设计、构建羊奶粉营养安全信息管理系统,从而为羊乳产品中掺假牛乳成分检测和营养安全质量监控提供参考方法和基础数据。得到的主要结果如下:（1）基于DNA的羊乳产品中牛乳成分定性和定量检测方法研究及试剂盒开发。使用改进的乳清粉DNA提取方法得到的DNA浓度在122～179 ng/μL之间,OD260/280值为1.53～1.75,完整性良好。普通PCR的牛乳成分检测灵敏度为0.05ng/μL,检测限为0.1%,q PCR的牛乳成分检测灵敏度为0.01 ng/μL,牛乳成分含量在0.1%～30%内可用标准曲线定量测定。该方法检测牛乳成分的相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）小于5%,变异系数（Coefficient of Variation,CV）接近或小于5%,说明该方法能够准确、可靠的实现对牛乳成分的定性定量检测。在此研究下开发了分别针对羊乳清粉和羊奶粉中掺假牛乳成分的定性定量检测试剂盒,从外观、试剂盒组成、具体操作步骤、结果判断以及注意事项等方面开发了羊乳产品掺牛乳成分的定性定量检测试剂盒。（2）市售羊奶粉DNA质量评价及牛乳掺假检测。比较了纯羊奶粉和配方羊奶粉中DNA品质（产量、纯度、完整性）的差异,纯羊奶粉DNA的OD260/280值约1.4,配方羊奶粉约1.25,纯羊奶粉的OD260/280值显著高于配方羊奶粉（P＜0.05）。DNA含量在200～500 ng/μL之间,纯羊奶粉显著高于配方羊奶粉（P＜0.05）。羊奶粉DNA有明显降解。普通PCR和q PCR的检测限为0.1%,牛乳含量在0.1%～50%范围内定量标准曲线良好（R~2=0.9869）。利用羊乳产品检测试剂盒检测到38种市售羊奶粉中有4种国产羊奶粉含有未注明的牛乳成分,其中1种产品牛乳成分含量高于50%。（3）羊奶粉营养安全信息管理系统的设计与构建。对以羊奶粉产品检测数据整合、分析等为核心的羊奶粉营养安全信息管理系统进行设计与开发。将系统逻辑框架结构分为用户管理层、系统功能层和数据存储层;系统主要功能模块包括系统管理模块、数据上传添加模块、快速查询模块以及专题分析模块,系统管理模块对数据的可靠性和安全性提供保障,数据上传添加模块实现数据的扩充性和分析结果的多样性,快速查询模块实现数据精确性与扩展性搜索,专题分析模块可根据不同专题区域查看数据与分析结果;该系统经过功能测试以及压力测试,数据管理在高负载条件下时仍在可控范围内,运行过程中的Web界面、数据的操作可正常运行,羊奶粉营养安全信息管理系统能够达到基本要求。
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