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目的:喹诺酮(quinolone)类抗生素按其开发年代和结构特点主要分为四代，环丙沙星作为第三代喹诺酮类抗生素的代表药物，广泛用于治疗各种感染，包括呼吸道和尿路等多部位的感染。近年来，随着该类药物的大量应用，临床大肠埃希菌(Escherichia coli，E.coli)的耐药问题也同趋严重，最新的研究发现，大肠埃希菌sRNA与细菌耐药有关。sRNA(small non-coding RNA，sRNA)广泛存在于各种生物体内，其中大肠埃希菌中约100种，这些sRNA通过多种转录后调控方式参与细菌的生物学过程，如环境应答、物质代谢、蛋白质合成和细菌致病性等。本研究以临床分离的21株大肠埃希菌为研究对象，以环丙沙星(ciprofloxacin，CIP)作为喹诺酮类抗生素的代表药物，将自然条件下sRNA水平与CIP处理后sRNA水平相比较，分析sRNA的表达水平在喹诺酮类抗生素刺激下的变化，阐明21株大肠埃希菌临床株sRNA变化的意义及其与大肠埃希菌喹诺酮类抗生素耐药的关系。 方法:自临床收集21株大肠埃希菌，微孔法检测细菌对CIP的药物敏感性。分别用亚抑菌浓度(subinhibitory concentration,sub-MIC)，即1/2MIC和4μg/mL(Plasma Concentration)，即4μg/mL的CIP处理细菌，实时荧光定量PCR(real time Polymerase chain reaction，real-time PCR)技术对细菌RyhB、ArcZ、GcvB、OxyS和McaS5种sRNA片段扩增，检测敏感及耐药大肠埃希菌在不同浓度CIP处理下各sRNA的变化，同时测定21株大肠埃希菌临床株在CIP处理前后的氧化应激水平。超氧自由基阴离子(superoxideradical，O-2)、过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）、羟自由基或氢氧基(hydroxylradical，OH-)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species，ROS)的产生或增多将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯(6-chloromethy1-2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetylester;CM-H2DCFDA)探针可穿过细胞膜，被过氧化氢等氧化而产生荧光，据此可以检测不同浓度CIP处理后细菌氧化应激水平的变化，并分析sRNA与细菌氧化应激反应的关系，证明sRNA与细菌耐药的关系。 结果:本研究根据细菌药物敏感性检测结果将细菌分为敏感组（10株）和耐药组（11株）;自然条件下敏感及耐药菌均检测到上述5种sRNA，其中敏感菌OxyS表达水平高于耐药菌(p＜0.05);1/2MIC CIP刺激后，敏感菌OxyS水平下降(p＜0.05);4μg/mL CIP刺激后，敏感菌GcvB水平下降(p＜0.05)，OxyS水平下降(p＜0.01)，耐药菌OxyS水平升高(p＜0.05);当CIP浓度从1/2MIC上升到4μg/mL，耐药菌RyhB水平上升(p＜0.05)。自然条件下耐药菌ArcZ与ROS水平呈正相关(r=0.5540，p＜0.05)，4μg/mL CIP刺激下耐药菌OxyS与ROS的表达水平呈负相关（r=-0.6541，p＜0.01）;耐药菌McaS与ROS的表达水平呈负相关(r=-0.7107，p＜0.05);1/2MICCIP刺激下耐药菌OxyS与ROS的表达水平呈负相关(r=-0.8245，p＜0.01);敏感菌McaS与ROS的表达水平呈负相关(r=-0.6931，p＜0.05)。 结论:环丙沙星作用下大肠埃希菌临床株5种sRNA中OxyS与GcvB的表达水平发生变化，其余无明显变化。5种sRNA中只有OxyS参与了大肠埃希菌临床株的环丙沙星耐药，具体机制可能与降低细菌的氧化应激水平有关