背景:帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是仅次于阿尔兹海默病的第二大中枢神经系统疾病,其主要的病理特征为中脑黑质致密部（Substantia nigra pars compacta,SNpc）多巴胺（Dopamine,DA）能神经元进行性死亡、纹状体区DA含量显著降低以及残存神经元内路易氏小体沉积。一般认为PD的病因及发病机制涉及到线粒体氧化应激、免疫反应、兴奋性氨基酸毒性、内质网应激、细胞凋亡与自噬等多方面。近来研究证明,PD与糖尿病（Type2 Diabetes Mellitus,T2DM）有着共同的病理生理途径,并且胰高血糖素样肽1（Glucagon-like protein 1,GLP-1）已被批准上市应用于T2DM的治疗。基于两病的相似性及GLP-1中枢作用,提出一个治疗PD的新策略:用治疗T2DM的药物来干预PD。本实验室前期研究表明GLP-1类似物如liraglutide、Lixisenatide、（Val8）GLP-1及受体激动剂京尼平苷均能明显改善PD小鼠的行为异常,通过调节相关凋亡蛋白的表达保护DA能神经元。胃泌酸调节素类似物（D-Ser₂-oxyntomodulin,D-Ser₂-OXM）具有胰高血糖素受体和GLP-1受体双重的激活特性,相比于GLP-1单受体激动药及其类似物,D-Ser₂-OXM的改善糖代谢、减肥作用更加明显。我们推测D-Ser₂-OXM可能通过激活脑内胰高血糖素和GLP-1双受体通路抑制PD病理生理学变化,进而实现神经保护作用及防止DA能神经元变性。第一部分D-Ser₂-OXM对MPTP诱导的亚急性PD模型小鼠的神经保护作用目的:1.观察D-Ser₂-OXM能否改善亚急性PD小鼠行为学障碍、减轻中脑DA能神经元损伤。2.探讨d-ser2-oxm是否能降低中脑神经炎症反应、增加突触数量或促进轴突重建以及调节凋亡相关蛋白表达,对抗mptp诱导的da能神经元的丢失。3.探讨d-ser2-oxm是否通过pi3k/akt通路发挥神经保护作用。方法:1.动物分组及模型制备:c57bl/6小鼠称重后随机分为4组:正常对照组（control）:生理盐水（ns,ip.）+ns（ip.）;d-ser2-oxm单给药组（oxy）:ns（ip.）+oxy（ip.）;mptp组（mptp）:mptp（ip.）+ns（ip.）;d-ser2-oxm治疗组（mptp+oxy）:mptp（ip.）+oxy（ip.）。四组接受ns或mptp（20mg/kg,i.p）连续7d;在注射mptp1h后用给予ns或d-ser2-oxm（ip.）,连续14d。2.行为学实验:于处死前一天,完成行为学实验,观测小鼠行为学的变化。3.免疫组化方法分别检测各组小鼠中脑黑质th、gfap、iba-1、synaptophysin及纹状体th表达情况。4.tunel染色分别检测各组小鼠黑质区凋亡细胞数量。5.采用蛋白质印迹法（westernblotting）分别检测各组小鼠黑质中th、α-synuclein、bax、bcl-2、tnf-α、synaptophysin、akt、p-aktser473的蛋白表达情况。结果:1.成功复制亚急性pd小鼠模型。给予mptp后,小鼠出现震颤、竖尾、呼吸急促等异常表现,约1h后上述症状逐渐减轻。通过自主活动、转棒、游泳、牵引等行为学检测小鼠的协调能力与肢体的灵活性。与对照组比较,mptp模型组小鼠的直立次数、爬格数、掉落潜伏期、牵引评分及游泳评分显著降低。而d-ser2-oxm治疗组小鼠的行为活动较mptp模型组小鼠有所改善。2.免疫组织化学检测结果显示:mptp模型组小鼠黑质syn、th及纹状体th阳性表达较对照组显著减少,与mptp模型组相比,d-ser2-oxm治疗组小鼠黑质syn、th及纹状体th阳性表达明显增加。gfap、iba-1在中脑黑质区的表达发现:mptp损伤之后,gfap、iba-1阳性表达较对照组的显著增多。而d-ser2-oxm治疗组小鼠黑质区gfap、iba-1阳性表达较mptp组明显减少。5.tunel染色结果显示:各组小鼠黑质区均可见tunel阳性细胞。与对照组比较,mptp模型组tunel阳性染色率显著性升高。而d-ser2-oxm治疗组小鼠的tunel阳性染色率较模型组明显降低。6.westernblotting方法检测结果显示:mptp模型组小鼠的tnf-α表达量及bax/bcl-2比值较对照组显著增加,th、syn阳性表达及p-aktser473水平较对照组显著降低;给予d-ser2-oxm治疗后,可降低黑质区tnf-α的表达,下调bax/bcl-2比值,此外还可以增加黑质区th、syn蛋白的表达,提高akt的磷酸化。各组小鼠黑质区α-synuclein蛋白水平并无显著改变。结论:1.d-ser2-oxm能够改善亚急性pd模型小鼠行为学障碍,减少中脑黑质及纹状体da能神经元的凋亡,增加其存活数量。2.d-ser2-oxm能够抑制中脑神经炎症反应、增加突触数量或促进轴突重建以及调节凋亡相关蛋白表达,对抗mptp损伤引起的da能神经元的丢失。3.d-ser2-oxm可能通过激活pi3k/akt通路发挥神经保护作用。第二部分d-ser2-oxm对mptp诱导的慢性pd模型小鼠的神经保护作用目的:观察d-ser2-oxm可否改善慢性pd模型小鼠行为学障碍及病理特征性改变。方法:1.动物分组及模型制备:c57bl/6小鼠称重后随机分为4组:正常对照组（control）:生理盐水（ns,ip.）+ns（ip.）;d-ser2-oxm单给药组（oxy）:ns（ip.）+oxy（ip.）;mptp组（mptp）:mptp（ip.）+ns（ip.）;d-ser2-oxm治疗组（mptp+oxy）:mptp（ip.）+oxy（ip.）。皮下注射mptp20mg/kg,1h后腹腔注射丙磺舒250mg/kg,一周两次,连续5周;注射mptp1h前用给予ns或d-ser2-oxm（ip.）,连续腹腔注射5周。2.最后一次MPTP注射后3天,进行转棒及旷场实验,行为学完成后取脑。3.免疫组织化学方法观察黑质及纹状体中TH阳性表达,Western Blotting分别检测各组小鼠黑质中TH、α-synuclein表达变化。结果:1.成功复制了慢性PD小鼠模型,并观察到D-Ser₂-OXM改善了MPTP对小鼠造成的行为学障碍。行为学检测小鼠协调运动能力与肢体的灵活性。与对照组进行比较,MPTP模型组小鼠的直立次数、爬格数、掉落潜伏期显著降低。而D-Ser₂-OXM治疗组小鼠的行为活动较MPTP模型组小鼠有所改善。2.免疫组织化学检测结果显示:MPTP模型组小鼠黑质及纹状体TH阳性表达较对照组显著减少,与MPTP模型组相比,D-Ser₂-OXM治疗组小鼠纹状体及黑质TH阳性表达明显增加。3.Western blotting方法检测结果显示:MPTP模型组小鼠黑质区TH阳性表达较对照组显著降低,α-synuclein表达量显著增加;给予D-Ser₂-OXM治疗后,可增加TH表达量,降低α-synuclein表达量。结论:D-Ser₂-OXM能够改善MPTP诱导的PD小鼠行为学障碍,减少中脑黑质及纹状体DA能神经元的凋亡,抑制α-synuclein的沉积。