论文部分内容阅读
目的: 阿片类药物作为一类强力镇痛药广泛运用于临床，伴随着阿片类药物的大剂量使用，阿片依赖和阿片介导的痛觉过敏现象这两大问题有待解决。国内有研究显示瑞芬太尼较其他阿片类药物更易诱导痛觉过敏的产生。瑞芬太尼诱发的痛觉过敏（RIH）指经过瑞芬太尼输注后，机体痛阈下降，对疼痛耐受降低的现象。对于术后病人，瑞芬太尼痛觉过敏会增加患者不良体验，影响患者身心健康的恢复。但目前瑞芬太尼痛敏的机制尚未有定论，其预防和治疗也有待进一步的研究。 细胞自噬指细胞内形成自噬体，吞噬并降解细胞内部大分子，调节自身物质循环的过程。自噬可依据自噬泡形成分为大自噬、小自噬、分子介导的自噬。多项研究表明自噬具有神经保护作用，能平衡氧化应激和降解错误折叠蛋白。有研究表示ROS-Nrf2-p62-自噬通路可以通过调节p62水平介导自噬，而适当的自噬调节可以协助消除ROS从而改善痛敏现象[1]。 于本实验，我们以瑞芬太尼诱导尾静脉置管的大鼠痛觉过敏的动物模型为研究对象，并进行自噬水平的调节。研究瑞芬太尼诱导痛觉过敏这一过程中自噬水平发生改变，并通过干预自噬水平以图改善瑞芬太尼痛觉过敏的作用。 方法: 该研究就主要分为两部分。 第一部分：瑞芬太尼痛觉过敏中Nrf2下游蛋白HO-1及自噬相关蛋白的表达变化。建立瑞芬太尼痛觉过敏模型，通过行为学测定判断是否发生了RIH。取造模成功的大鼠在腰膨大组织中检测 HO-1、p62的表达并检测自噬相关蛋白Beclin1的表达变化。 选取36只大鼠，于造模前1日禁食，造模前4小时禁水。随机法将大鼠分为C、R、I、RI四组，每组9只。对照组（C组）：经尾静脉置管泵注生理盐水（NS）；切口痛组（I组）：经尾静脉置管泵注生理盐水（NS），同时按照Brennan法建立切口痛模型；瑞芬太尼组（R组）：经尾静脉置管泵注瑞芬太尼注射液，不予切口痛处理；瑞芬太尼+切口痛组（R+I组）：经尾静脉持续输注瑞芬太尼，并按照 Brennan法建立切口痛模型；生理盐水输注剂量为0.1ml·kg-1·min-1输注时间1小时；瑞芬太尼输注剂量为1.0μg·kg-1·min-1，溶液浓度为：10μg·ml，输注时间为1小时。 造模完成后测定大鼠行为学变化，测定完成后处死大鼠，提取腰膨大蛋白，进行荧光染色及westen blot测定。 第二部分：调节自噬对瑞芬太尼痛觉过敏的影响。在第一部分的基础上取9只大鼠分为RI组，造瑞芬太尼痛觉过敏模型，于造模前1小时给予大鼠自噬激动剂雷帕霉素腹腔注射，通过雷帕霉素上调自噬水平，随后检测行为学变化，测定后处死大鼠提取腰膨大处蛋白，采用Western Blot法测定大鼠脊髓背角总蛋白及自噬相关蛋白p62、LC3、Beclin-1表达情况，并检测SOD和MDA的水平以证实氧化应激可以通过自噬调节得到改善。 结果: 1、行为学结果表明：RI组大鼠与C组、R组、I组相比，痛阈显著降低，具有统计学差异(P<0.01)。R组、I组行为学数据相比较，数值较一致，统计学上不具有意义。RI组成功诱发了瑞芬太尼痛觉过敏。 2、免疫荧光结果显示，RI组于C组相比，HO-1表达较正常对照组显著降低（p＜0.05）；p62含量较正常对照组明显升高（p＜0.05）。 3、SOD、MDA结果表明：RI组于C组相比，氧化应激指标明显升高，差异具有统计学意义（p＜0.05）。RA组与RI组相比，氧化应激指标显著降低，差异具有统计学意义（p＜0.05）。 4、Westernblot的结果显示：RI组大鼠与C组、R组、I组相比，p62含量较正常对照组明显升高（p＜0.05）；Beclin-1、LC3、HO-1含量明显降低，差异具有统计学意义（p＜0.05），RA组与 RI组相比，LC3，Beclin1表达增加，差异具有统计学意义（p＜0.05）。 结论: 1.瑞芬太尼痛敏模型中，HO-1表达降低，p62表达上调，Beclin-1、LC3的表达抑制，自噬水平具降低。 2.给予雷帕霉素激活自噬反向调节自噬变化后，大鼠行为学改善。 3.瑞芬太尼痛觉过敏中，氧化应激水平升高，反向调节自噬后，SOD，MDA均有改善。