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目的获得能够过表达OPTN和TAU-P301-L基因的重组腺相关病毒,进行体外对293T细胞的感染和体内对昆明小鼠的感染,探究OPTN蛋白和TAU-P301-L蛋白对自噬、凋亡和PI3K/AKT/m TOR通路的影响,对阿尔茨海默氏病(alzheimer’s disease,AD)的治疗提供新的思路。方法从含有目的基因的大肠杆菌中提取包涵目的基因的质粒,利用PCR扩增获得目的基因,目的基因OPTN构建到p AAV-IRES-Zs Green1载体,目的基因TAU-P301L-V5构建到p AAV-CMV-mkate-IRES载体。鉴定质粒阳性克隆并测序。重组质粒p AAV-IRES-Zs Green1-AAV9-OPTN和p AAV-CMV-mkate-IRES-AAV9-Tau-P301L-V5分别与包装质粒p AAV-RC9、辅助质粒p Helper通过LipofiterTM2000共转染293T细胞,获得AAV9病毒。利用相同方法,不使用目的基因构建对应绿色和红色AAV9对照病毒。q PCR法测定重组腺相关病毒载体滴度,病毒载体感染293T细胞进行病毒有效性及安全性鉴定,Western blotting和RT-PCR进行蛋白表达的鉴定,MTT检测OPTN蛋白与TAU-P301-L蛋白对293T细胞活力的影响。q PCR检测TAU、OPTN、AKT、PI3K和m TOR的m RNA,Western blotting检测OPTN、TAU、p TAU、caspase 3、PI3K、AKT、m TOR和LC3蛋白。荧光显微镜观察TAU-P301-L蛋白病理性扩散和OPTN蛋白与TAU蛋白的共定位。结果测序结果显示成功构建p AAV-IRES-Zs Green1-AAV9-OPTN和p AAV-CMV-mkate-IRES-AAV9-Tau-P301L-V5腺相关病毒载体,q PCR测得病毒滴度为1.0×1012vg/m L,病毒载体感染293T细胞转染效率为33.6%和20.5%,Western blot和RT-PCR显示蛋白过量表达。MTT结果显示OPTN组挽救了TAU-P301-L组的细胞凋亡。OPTN蛋白与TAU蛋白在小鼠体内实现了高度的共定位,OPTN可以通过降低PI3K/AKT/m TOR途径的活性增强自噬。结论成功构建过表达OPTN和TAU-P301-L基因的腺相关病毒。OPTN蛋白可以减弱TAU-P301-L蛋白的细胞毒性。OPTN减少了TAU蛋白细胞导致的凋亡,清除异常蛋白TAU的聚集缓解神经毒性,为AD的治疗提供了新的可能性。